人脐带间充质干细胞对未成熟脑脑室周围白质软化神经保护作用的研究

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目的:建立未成熟脑脑室周围白质软化(Periventricular leukomalacia,PVL)动物模型,经腹腔移植人脐带间充质干细胞(Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,HUcMSC),探讨HUcMSC在未成熟脑定向迁移以及对受损脑组织的神经保护作用。  方法:5日龄(P5d)新生大鼠40只随机分为迁移组和假手术组、HuMSCs移植组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组;每组各10只乳鼠。每组又根据处死注时间的不同随机分为生后1天、19天两个时间点。体外培养HUcMSC;假手术组只行血管分离,不结扎左侧颁总动脉也不放入缺氧舱内。迁移组、HUcMSC移植组和PBS对照组建立新生大鼠PVL(Periventricular Leucumalacia)动物模型。迁移组和假手术组每只实验鼠经腹腔给予Brdu标记的HuMSC1×107/0.05PBSml悬液注射入体内,24小时后(P6d)处死,BrdU免疫组化染色方法观察HUcMSC在实验鼠脑内的迁移;HUcMSC移植组和PBS对照组分别在造模后经腹腔注射第二代HUcMSC(1×107/0.05PBSml)以及0.05mlPBS无菌溶液,在第14d,应用7.0微型MRI(MicroMRI)扫描观察HUcMSC对病变区域修复程度,评估实验鼠远期神经行为学,MBP免疫组化疗法观察移植HUcMSC对髓鞘形成的影响,评估HUcMSC对早产儿PVL的神经保护作用。  结果:1、BrdU免疫组化染色显示移植HUcMSC后24小时,迁移组实验鼠脑白质内出现Brdu染色阳性细胞(2.10士0.99)较假手术组(0.90±0.74)多,存在统计学意义(P<0.05);2、移植HUcMSC组在干细胞干预后24小时应用MicroMRI扫描在T2W2上可见明显高信号,第14d在T2W2上未见异常信号;PBS对照组大鼠在PBS干预24小时后应用MicroMRI扫描,在T2W2上可见明显高信号,第14d在T1W1可见低信号,脑白质软化灶形成;3、第14d,HUcMSC移植组大鼠悬吊试验(3.40±0.966)、旷场试验(1.60±0.516)、拒俘反应(3.00±0.816)实验评分均较PBS对照组悬吊试验(1.8±0.789)、旷场试验(0.6±0.516)、拒俘反应(1.30±1.059)高,存在统计学意义(P<0.05);4、两周后移植HUcMSC组髓磷脂碱性蛋白(MBP)染色阳性细胞数(13.95±1.57)明显多于PBS对照组(10.22±1.02),存在统计学意义(P<0.05)。  结论:1、HUcMSC经腹腔移植可向病变部位定向迁移;2、HUcMSC干预后MBP标记细胞增彩,减轻髓鞘形成障碍;3、微型MRI扫描实验鼠PVL病变面积显著缩小;4、HUcMSC干预PVL后,动物远期运动功能改善。HUcMSC具有神经保护作用。
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