论文部分内容阅读
目的:建立高脂高胆固醇饮食诱导青少年大鼠NAFLD模型,观察不同剂量UDCA在早期阶段对其治疗效果。观察该时期NAFLD模型特点以及确定UDCA治疗剂量。方法:36只SD大鼠随机分为2组,正常对照组(NC组,n=12只),高脂高胆固醇组(n=24只),分别予以正常饮食、高脂高胆固醇饮食,4周后高脂高胆固醇组随机分为高脂高胆固醇模型组(HF组,n=12)、小剂量UDCA15mg/kg/d组(D1组,n=4)、中剂量30mg/kg/d UDCA组(D2组,n=4)、大剂量100mg/kg/d UDCA组(D3组,n=4),共5组。NC组继续给予正常饮食;HF组、D1组、D2组、D3组继续给予高脂高胆固醇饮食。给予各药物组定量UDCA灌胃,HF组和NC组给予等量生理盐水灌胃,共干预4周。分别于第4周、第6周处死NC组和HF组各4只SD大鼠,第八周处死全部SD大鼠。收集标本:收集静脉血分析肝功能、血脂,收集肝脏、回肠组织做病理分析,免疫组化分析回肠occludin蛋白表达水平。结果:1.HF组大鼠体重逐渐大于NC组,从第3周开始差异显著(P<0.05)。随着UDCA剂量增大,大鼠体重越轻,但是与HF组无显著差异(P>0.05)。HF组肝湿重显著高于NC组(p<0.05)。随着UDCA剂量增大,大鼠肝湿重越低,D3组肝湿重明显低于HF组(19.44±0.11 vs 21.88±0.47,p<0.05)。NC组和HF大鼠肝指数均先降低后升高,HF组大鼠肝指数始终显著高于NC组,第4、8周差异最明显(p<0.05)。随着UDCA剂量增大,肝指数越低,D3组肝指数明显低于HF组(3.98±0.08 vs 4.40±0.14,p<0.05)。2.HF组和NC组大鼠AST先降低后升高;第8周时HF组AST水平比NC组稍高(P>0.05)。UDCA剂量越大,AST水平越高(P>0.05)。HF组和NC组SD大鼠GGT水平均下降(P>0.05)。UDCA剂量越大,GGT水平越高。D2组GGT水平显著高于D1组(0.80±0.5 vs0.20±0.45,P<0.05)。D3组GGT水平显著高于HF组和D1组(1.00±0.00 vs0.25±0.50,P<0.05;1.00±0.00 vs 0.20±0.45,P<0.05)。HF和NC组TBA水平先降低后升高,HF组和NC组无明显差异。UDCA剂量越大,大鼠TBA水平越高,但差异不显著(P>0.05)。NC组TG水平无明显变化,HF组TG水平呈现先下降后上升趋势。第8周时各组间TG水平差异不显著(P>0.05)。NC组和HF组大鼠CHO水平呈下降趋势。HF组大鼠CHO水平高于NC组,第4周和第6周差距显著(p<0.05)。各药物组大鼠CHO水平高于HF组,其中D1和D3组显著高于HF组(2.34±0.53 vs 1.69±0.16,P<0.05;)。2.29±0.50 vs1.69±0.16,P<0.05)。3.肝脏病理学改变:HF组主要表现为肝内脂肪变性,小叶内可见少量点状坏死灶,肝细胞水肿,部分肝小叶内可见气球样变性,肝内脂肪变性在第4周可见大泡性脂肪变性伴微泡性脂肪变性,大泡性脂肪变性以大、中脂滴为主,第6周与第4周相比,脂肪变性加重,大泡性脂肪变性以中、小脂滴为主,第8周,脂肪变性缓解,以微泡性脂肪变为主伴有少量大泡性脂肪变。NAS积分表现第6周明显高于第4周,第8周稍低于第6周(2.25±0.96 vs4.25±0.96 vs 3.75±1.26,P=0.063)。第8周时各药物组与HF组比较,UDCA剂量越大,肝细胞脂肪变明显好转,肝细胞水肿越轻,但是小叶内点状坏死灶逐渐增多,NAS积分随着UDCA增大逐渐降低,其中D3组显著低于HF组(2.25±0.50 vs 3.75±1.26,p<0.05)。4.回肠改变:HE染色:HF组部分回肠绒毛变短、变宽,局部有绒毛脱落,绒毛排列不规则;其中第6周好于第4周,第8周时再次加重。随着UDCA剂量增大,绒毛水肿好转,排列较整齐。其中D2与D3相似,均好于D1组。Occludin蛋白免疫组化表现:NC组、HF组及各药物组的occludin蛋白染色呈棕褐色,并且连续分布于肠粘膜上皮细胞膜和细胞浆,染色评分差异不显著(P>0.05)。但是HF组在第4周时染色较NC组深。第6、8周时,染色较NC组浅。在HF组内,随着时间改变染色逐渐变浅。在第8周,D1组染色与NC组类似,D2、D3组染色较NC组、HF和D1组浅。结论:1.青少年大鼠NAFLD肝内脂肪变性改善时肝细胞损伤加重;UDCA可改善大鼠脂肪变性和细胞水肿,但是随着剂量增大肝细胞损伤加重并且可能导致肠粘膜屏障损伤。2.青少年大鼠肝功能和血脂有变化趋势,NAFLD可导致肝功能和血脂异常,UDCA可改善肝功能,但不能改善血脂。