【摘 要】
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实验目的:研究NS基因特异性RNA干扰对HeLa细胞的生长、增殖及细胞周期情况的影响.方法:利用该室构建的NS质粒载体,质粒扩增并纯化后,通过脂质体转染导入HeLa细胞,经过Zeocin
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实验目的:研究NS基因特异性RNA干扰对HeLa细胞的生长、增殖及细胞周期情况的影响.方法:利用该室构建的NS质粒载体,质粒扩增并纯化后,通过脂质体转染导入HeLa细胞,经过Zeocin抗性压力法及PCR法筛选出NS-silencer HeLa细胞克隆,并扩大培养.在同时设立Normal HeLa细胞对照组的情况下,①利用细胞计数法绘制细胞生长曲线;②利用MTT法测试细胞增殖率;③利用流式细胞仪进行细胞周期的测定.结果:NS基因被沉默的HeLa细胞(silencer组)增殖速率明显低于正常HeLa细胞;silencer组细胞增殖抑制率在80％左右;silencer组细胞处于G0/G1期明显增多,而S期则明显减少.并且silencer组DNA异倍体数量及S-phase细胞比值较Normal组均有明显下降.结论:HeLa细胞NS基因被转录后沉默之后,其增殖速率明显降低,其恶性度也同时降低,预后状况改善.从而肯定NS基因在HeLa细胞的自我更新和恶性生长中发挥重要作用,这可能为恶性肿瘤基因治疗提供新的研究靶向.同时,RNA干扰技术在NS基因沉默过程的应用,又为这一领域的研究工作提供了方便、特效、快捷的手段.
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