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哺乳动物卵泡在发育过程中会伴随着大量的卵泡闭锁(atresia),卵泡闭锁是一个多种因子参与的复杂的调控过程,对于卵泡闭锁机制进一步研究,有助于提高动物繁殖率。卵母细胞和颗粒细胞的凋亡是卵泡闭锁的本质。卵泡发育的腔前后期、早期有腔卵泡以及成熟(排卵前)卵泡闭锁则主要是颗粒细胞或膜细胞凋亡造成的。大量的研究表明,细胞凋亡发生在卵泡发育的每一个阶段,其中颗粒细胞的凋亡则是导致卵泡闭锁的重要直接的原因。从腔前后期到排卵前阶段,颗粒细胞层的生存发育能力是决定卵泡命运的主要因素。卵泡的发育与血管密切相关,每个卵泡可以独立调节血管的新生。小卵泡周围是没有血管的。随着卵泡直径的增长,卵泡周围的血管分支逐渐增多,以用来供给卵泡发育足够的养分。通过更高级的血管网提供优先的养分对于优势卵泡发育是十分重要的。血管内皮细胞的减少能够导致卵泡颗粒细胞的凋亡,进而导致卵泡的闭锁.VEGF是血管内皮细胞特异性有丝分裂原,是一种极强的血管生成促进剂,它可以诱导内皮细胞的增值和迁移,抑制内皮细胞的凋亡,促使血管增生。同时VEGF还可以增加血管的通透性,从而利于物质交流。VEGF主要在排卵前卵泡的颗粒细胞和膜细胞表达。因此,本研究拟探索用慢病毒载体超表达小鼠卵巢颗粒细胞内的VEGF基因,为获得卵巢内超表达VEGF转基因小鼠并深入研究VEGF在小鼠卵泡发育过程中的作用提供基础及一些细节。我们首先构建了分别含有CMV和CYP19启动子的质粒,通过在不同细胞内的瞬时转染,确定了CYP19启动子在卵巢颗粒细胞内的组织特异性。以此为基础,我们构建了慢病毒超表达载体pL-CYP19-VEGF,成功的促进了颗粒细胞中的VEGF的表达,效果极显著(p<0.01)。随后我们生产了含有特异性超表达载体pL-CYP19-VEGF的慢病毒,筛选出感染一个六孔板的最适病毒量,荧光定量PCR结果显示,浓缩的慢病毒能极显著促进颗粒细胞中VEGF的表达量(p<0.01)。与此同时,我们还检测了颗粒细胞中的一些凋亡基因的表达变化。发现CASPASE-9、 CASPASE-3、CASPASE-8表达量显著下降(p<0.05),Bcl-2/Bax的比值升高,TRAIL表达量上升。结论：我们成功用慢病毒载体递送VEGF基因CDS区全长到小鼠卵巢颗粒细胞中,触发了有效的VEGF基因的超表达,同时检测出抗凋亡基因表达变化。本研究获得的超表达VEGF基因的慢病毒颗粒可以进一步用于制备转基因小鼠,为在活体上观察VEGF对卵泡发育的影响提供了基础。