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原发性肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一,HCC的发生是病毒感染、致癌物的作用、癌基因的激活与抑癌基因的失活、肝细胞凋亡及增殖失控等多个因素协同作用的结果。其中,癌基因和抑癌基因的突变是肝癌发生的分子基础。三组氨酸核苷结合蛋白1(Histidine triad nucleotide-binding protein, HINT1)是一种新型的肿瘤抑癌基因,具有肿瘤抑制的作用,其在组织中表达的高低与肝癌的发生、发展及转移密切相关。越来越多的证据表明,HINT1在控制基因转录的几个途径中起着抑制作用,但其具体的抑癌机理尚不清楚。核转录因子-1B (nuclear transcription factor-KB, NF-kB)的持续活化可调控细胞增殖,抑制细胞凋亡,促进肿瘤形成。而核因子kB抑制因子(inhibitor of NF-kB a, IKB-a)通过与NF-KB结合使其失去活性。本研究探讨HINT1抑癌作用是否与IKB-a及NF-κB通路有关是,并探讨其可能的抑癌机制。目的1、探讨NF-KBp50及IKB-a在人肝细胞癌组织中的表达及肝癌临床表达相关性；2、研究体外过表达Hintl基因对人肝癌细胞中IKB-a蛋白表达及NF-kB活性的影响,探讨Hint1可能的抑癌机制。方法1、利用免疫组化SP法检测肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织中NF-KBp50及IKB-a的表达,分析其内在联系及与HCC临床病理特征的关系。2、分子克隆获得Hintl基因序列,构建pHA-Hintl重组融合基因表达载体。阳离子脂质体Lipofectamine2000介导Hint1表达载体转染入人原发性肝癌细胞株QGY-7701中,分为转导组、Lipofectamine组、空载体pcDNA3.1(+)组,以未转导的为阴性对照。转导后培养24h、48h、72h、96h、120h,使用光学显微镜观察各组细胞形态。MTT法检测各组细胞OD殖,绘制细胞生长曲线；利用Westernblot方法检测细胞转导Hintl表达载体后Hintl与IKB-a及NF-κB的蛋白表达情况.结果1、免疫组化结果显示,肝癌组织中NF-KBp50的表达阳性率为86%,明显高于癌旁组织及正常肝组织的47%、13%(P<0.05),具有统计学意义；肝癌组织中IKB-a的蛋白表达阳性率为18%,显著低于癌旁及正常肝组织中的阳性表达率62%、100%(P<0.05),具有统计学意义。Spearman等级相关分析,肝癌组织中NF-KBp50与IKB-a的蛋白表达呈负相关(rs=-0.411,P=0.003)。NF-KBp50与IKB-a蛋白表达的高低均与性别、年龄及肿瘤大小无关(P>0.05),与HBsAg、肿瘤分化程度、AFP水平及TNM分期有关(P<0.05)。2、转染前同等营养条件下培养,四组细胞生长形态及活力无明显差异,而转导后转染组细胞增殖较其它组细胞生长速度明显减慢,差异显著(P<O.05)；细胞生长曲线示转导后72hHintI组细胞增殖受到明显抑制。Westem blot方法结果示Hintl转染成功后,测得IKB-a蛋白表达较转染前明显增高,而NF-κB蛋白表达较转染前明显降低。结论1、HCC组织中,IKB-a部分表达缺失,而核因子NF-KBp50高表达；HCC组织中NF-kBP50的表达与IKB-a存在相关性,它们在肝癌的发生、发展中可能存在相关关系。2、1)Hint1因可以抑制肝癌细胞的增殖：2)Hint1基因转染成功后可以增强IKB-a蛋白的表达并抑制NF-κB的活性,为其发挥肿瘤抑制作用的可能机制之一提供理论依据。