MicroRNA调控下的RNAi途径关键基因及NBs-LRR类抗病基因在SMV侵染大豆中的作用研究

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植物通过不同层次的防卫反应来抵御外源病毒的侵染。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是植物针对病毒侵染的一个重要的应答反应,AGO(Argonaute)和Dicer/DCL(Dicer-like)蛋白是RNAi途径中的关键成分。效应蛋白诱导的免疫反应(Effector triggered immunity,ETI)一般指的是抗病基因(Resistance gene,R)介导的抗病毒机制。迄今为止发现的R蛋白多数属于NBS-LRR家族蛋白。MicroRNA(miRNA)是一类由生物体内源产生的、具有重要调节作用的非编码小RNA分子。近年来发现miRNA在植物的抗病反应中也发挥着很重要的作用。大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)是一种世界性大豆病害,严重影响着大豆的经济和商品价值。有研究表明miRNA在大豆种粒斑驳形成过程发挥着主要作用,同时发现SMV的侵染影响大豆内源小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)的积累水平。但是,目前没有一个系统的研究SMV侵染与大豆miRNA表达调控之间关系的报道。本论文中我们利用microarray技术在敏感大豆品系中筛选到了45个SMV响应的miRNAs。在上调的miRNAs中miR168a、miR403a、miR162b和miR1515a的预测靶标分别为AGO1、AGO2、DCL1和DCL2;miR1507a、miR1507c和miR482a的预测靶标为NBS-LRR家族的10个抗病基因。我们通过双荧光素酶报告系统与RLM-RACE实验证实了上述7个miRNAs对其10个靶标基因表达的调控作用。AGO1、DCL1、DCL2和5个NBS-LRR类抗病基因的表达受SMV侵染的抑制,同时相应miRNAs的丰度上调,并且它们之间的表达在SMV侵染后不同时间点均表现出相反的表达模式。我们的结果表明SMV会通过上调一些miRNAs来抑制RNAi途径相关基因及NBS-LRR家族抗病基因的表达,从而导致敏感大豆品系的感病。
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