依据微生物抑制法研制的检测牛奶中抗生素残留的试剂盒,因其使用方法简便而被广泛应用。目前试剂盒中的指示菌普遍采用嗜热脂肪芽孢杆菌。本研究以营养需求低、短时间内生长产酸、对常用抗生素敏感为基本原则,从高温环境中分离高温菌。以期分离得到符合试剂盒指示菌要求的菌株,并依据微生物抑制法原理,采用分离的菌株研发试剂盒。主要研究内容及结果如下：1)菌株的分离。从福州市晋安区洗涤厂排热口采集样品,将采集的水样和泥样混合并离心,处理后的混合液涂布于固体培养基中,置于55℃恒温培养箱中培养。依据菌落特征挑取生长较快的单菌落。初步分离纯化得到8株菌。2)菌株的筛选鉴定。依据能够在短时间内使培养液pH值降低、在简单的牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好、对常用抗生素敏感三个指标,对8株菌进行复筛,得到一株目标菌株FZ。经过16S rDNA序列分析,结合菌落形态、菌体形态、芽孢形态分析,确定菌株FZ属于厌氧杆菌属(Anoxybacillus)。3)试剂盒制备及参数优化。在单因素试验的基础上对包埋营养物进行优化,得出最佳包埋物为：0.3%葡萄糖、0.2%蛋白胨、0.1%牛肉膏；考察三种指示剂显色情况,确定溴甲酚紫作为最佳显色指示剂；优化包埋芽孢数量及添加牛乳量,得出包埋芽孢量为5×107cfu/mL;添加牛乳量为50μL-80μL。4)试剂盒对几种抗生素的检测限测定。试剂盒对12种抗生素的检测限如下：青霉素、氨苄青霉素：4μg/L；阿莫西林：5μg/L；四环素、土霉素、强力霉素：100μg/L；链霉素、庆大霉素：200μg/L；卡那霉素：1000μg/L；磺胺：100μg/L；磺胺嘧啶：200μg/L；红霉素：40μg/L。5)试剂盒的应用。对有抗奶(有抗生素残留)与无抗奶(无抗生素残留)检测结果的一致性说明试剂盒均一度很好。在检测随机购买的25种牛奶样品时,自制试剂盒检测出两种可疑样品,而商品试剂盒(Delvotest及ECLIPSE50检测试剂盒)则没有检测出可疑样品。其它检测结果与商品试剂盒一致。