基于银纳米粒子的蛋白质与小分子荧光分析方法研究

来源 :南京大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lm403379799
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
适配体是通过SELEX技术筛选得到的单链寡核苷酸,因其所具有的种种性质,如高稳定性,易合成以及能高特异性地结合多种目标分子(小分子,蛋白质甚至是整个细胞)等,所以,适配体受到了越来越多的关注。因为纳米材料具有的独特的光学、电学、催化特性的性质,使得它能够和生物分子相互作用,进而达到信号放大和目标识别的目的。两者结合起来所形成的适配体功能化纳米粒子,在生物分析和医疗诊断方面具有广泛的应用前景。在本文中,我们基于银纳米粒子对荧光的猝灭作用设计了一种简单且高灵敏的蛋白质检测分析方法。首先将修饰有荧光分子的适配体自组装到银纳米粒子表面,合成了银纳米粒子探针。固定在96孔板中的适配体,和银纳米粒子探针分别作为捕获单元和检测探针,可以完成对加入的目标蛋白PDGF-BB的特异性识别,三者形成三明治复合物。此时由于FRET(fluorescence resonance energy transfer,荧光共振能量转移)效应,荧光基团被银纳米粒子猝灭,信号处于“off”状态。当加入蚀刻剂硫代硫酸钠后,银纳米粒子被溶解,FRET效应被破坏,修饰在银纳米粒子表面的荧光分子便会脱离,并释放到孔板中,信号"turn-on"。结果表明,目标蛋白PDGF-BB的浓度与检测到的荧光信号的强度呈正比。该方法可以实现对目标蛋白的高灵敏和高特异性的检测。此方法具有以下优点:三明治结构能大大提高检测的特异性和灵敏度;蚀刻剂的引入使信号从“off”变为“on”。该方法还可以通过对适配体分子的合理设计,进一步扩展到其它蛋白或小分子的分析检测中,在分析领域具有良好的应用前景。基于纳米金属结构的LSPR(localized surface plasmon resonance,局部表面等离子体共振)的金属增强荧光(metal enhanced fluorescence, MEF)的发展,拓宽了荧光分析的应用范围。由于其独特的表面等离子体共振特性,银纳米粒子能够增强许多荧光分子信号,因此利用银纳米粒子的MEF效应,发展出很多应用。在本文中,基于银纳米粒子的MEF效应和FRET效应,我们建立一种小分子检测分析方法。首先,我们将荧光分子自组装至纳米银表面,然后在荧光分子外层包裹一层银壳,实现对荧光分子的荧光增强效果。然后,通过核酸杂交的方式将淬灭分子BHQ修饰的适配体连接至银壳上形成FRET传感器。此时荧光分子的荧光信号猝灭。而当加入目标物腺苷后,由于适配体与腺苷的特异性结合,BHQ脱离银壳表面,荧光信号得到恢复。实验结果显示,荧光的恢复程度与目标物腺苷的浓度呈线性关系。该方法充分利用了银纳米粒子的特性,灵敏度高,特异性强,且操作简单,拥有很大的潜力。
其他文献
人力资源会计是会计学的一个新兴的重要分支学科。随着经济的发展到今天,人力资源会计已经逐步建立起一套较完善的理论体系。特别是知识经济时代的到来,更为人力资源会计的推
半导体光催化技术以太阳能为能源,光激诱发半导体产生氧化还原能力,在环境污染治理方面有着极其重要的作用,俨然成为一种充满前景的太阳能转化利用技术。因此,开发和设计新型
旋转机械是现代工业生产设备中极其重要的组成部分,是诸多机械设备中的一个重要燕类。在各类旋转机械中,滚动轴承扮演着十分关键的角色。为了保障机械设备的正常运行,针对旋
非球形粒子因其形状不对称性而表现出优异的物理化学性能,在生物医学、光学材料等领域有巨大的应用价值。本文通过控制分散聚合过程中粒子内部的异相分离过程,成功制备出帽状
通过过渡金属催化活化C-H键,与另一分子化合物构建新的C-C键的反应目前已经是用简单小分子构建复杂化合物的一种有效手段。而钯作为催化剂参与此类反应的效果,尤为突出。在此
本文选取四种结构较为相似的1,3,4-噻二唑类衍生物:2-硫酮-5-硫醇-1,3,4-噻二唑(5-mercapto-1,3,4-thiadiazole-2-thione)、2-硫酮-1,3,4-噻二唑(1,3,4-thiadiazole-2-thione)
<正> 陀思妥耶夫斯基是一位十分复杂的作家。人们对他的评价毁誉参半,前后不同。六十年代以来,陀氏越来越引起评论家的注目,关于他的评论研究文章和学术讨论会不断出现。二十
<正>首次出现在党的十九大报告中的"乡村振兴战略"为近6亿中国农村人口擘画了宏伟而美好的蓝图。这是站在新的历史背景下,农业农村发展到新阶段的必然要求。十九大报告提出了
质子交换膜燃料电池(PEMFC)凭借其绿色环保,燃料来源丰富等优点而被认为是21世纪最具潜力的新型绿色能源。催化剂作为PEMFC的关键组件之一,对于PEMFC的发展与商业化应用起着
本论文结合目前金属以及非金属材料最前沿的制备技术,借鉴核壳纳米催化剂的制备手段,探索新型催化剂的制备方法,尝试将金属纳米粒子催化剂包裹在Si O2中,提高其稳定性,同时减