香菇多糖提取纯化的研究

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香菇多糖(Lentinan)是一类具有特殊生理活性的物质,具有调节人体生理功能,增强人体免疫机制及预防和治疗多种慢性疾病的作用。本文研究了香菇子实体多糖的提取、分离纯化、分析检测、理化性质等方面。   1、以干香菇子实体为原料,采用水提醇沉法提取其中的香菇粗多糖。通过单因素条件选择及正交试验研究了温度、时间、料液比及浸提次数对香菇多糖提取率的影响,实验得知影响总多糖得率的因素主次顺序为:A>D>B>C,即提取温度对试验结果影响最大,其次是提取次数,提取时间和用水量对提取率的影响较小。综合各个因素的影响,在保证多糖的提取率的同时,从节约能耗,减少浓缩时间的角度考虑,采用的最佳提取多糖工艺为A3B1C1D2,即提取温度为100℃,每次浸提2h,料液比1:15,提取2次,在提取液浓缩至原体积1/10的基础上,用3倍体积的无水乙醇(即75%醇沉)进行沉淀,然后离心取沉淀真空干燥得香菇多糖粗品。在该实验条件下进行三次提取实验,三次香菇多糖粗品得率的平均值为5.32%,粗品中的糖含量约为53%。   2、将得到的香菇多糖粗品用水溶解,木瓜蛋白酶结合Sevag法(氯仿:正丁醇(V/V)=4:1)除蛋白,乙醇沉淀,离心得沉淀,真空干燥,即得除蛋白香菇多糖。采用DEAE-cellulose柱层析和Sephadex G-200柱层析、透析从香菇子实体热水浸提的粗多糖中分离出两个多糖组分Lenl-A、Len2-A。   3、两个多糖组分Len1-A、Len2-A经旋光度法、Sepharose4B柱层析等方法检测确定Len1-A、Len2-A为均一多糖组分,红外光谱确定两个多糖组分Len1-A、Len2-A均有多糖的特征吸收峰,且均为吡喃糖,苯酚硫酸法测得其糖含量分别为94.7%和95.3%,将其进行酸水解而后,进行纸色谱分析测得Len1-A、Len2-A均由葡萄糖组成,为葡聚糖。旋光度分别为+5.6°、+11.2°,Sepharose4B柱层析测得Len1-A、Len2-A的分子量Mw分别为375 kD、718 kD。
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