刺梨花药和未受精胚珠离体培养

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本论文以刺梨系列品种花药和未受精胚珠为材料,对影响花药和未受精胚珠离体培养的关键因素进行了筛选,并开展了愈伤组织再分化试验,此外对愈伤组织及其分化器官作了细胞学鉴定。获得以下结果:1、确定了刺梨品种贵农1号、2号、5号、6号、7号小孢子处于单核期时花器的形态特征。2、愈伤组织诱导(1)小孢子处于单核期的花药最有利于愈伤组织的诱导。(2)所有参试刺梨品种花药和贵农1号、5号、6号、7号未受精胚珠低温预处理3d,愈伤组织诱导率最高;100 mg·L-1Vc浸泡预处理2h最有利于花药愈伤组织的诱导。(3)愈伤组织诱导率大小顺序为:贵农1号>贵农5号>贵农7号>贵农6号>贵农2号。(4)花药愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+3%蔗糖+3.Omg·L-1NAA+0.5mg·L-16-BA;未受精胚珠愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+5%蔗糖+1.0 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-16-BA。(5)培养基中附加100 mg·L-1Vc或50 mg·L-1AgNO3显著提高愈伤组织的诱导率,花药和未受精胚珠的最高诱导率分别为41.56%和83.47%。(6)随着取蕾时期的推移,愈伤组织诱导率呈现先增后降的趋势,花期的2-6周为最佳的取蕾时期。(7)黑暗条件下培养可以提高愈伤组织的诱导率。3、花药愈伤组织形态及其起源的细胞学观察初步判断一个月后花药壁四周或腹缝线形成的白色疏松颗粒状愈伤组织多数为花粉愈伤组织;小孢子脱分化的启动时间比药壁组织的时间晚1周左右;贴近药壁组织的小孢子较易形成愈伤组织。4、增殖与分化(1)花药愈伤组织的最佳继代周期为20-25d。(2)贵农1号未受精胚珠愈伤组织根的分化率高于贵农5号。(3)添加较高浓度的AgNO3有利于愈伤组织分化出根。(4)添加0.5mg·L-12,4-D有利于愈伤组织根分化。(5)愈伤组织类原球茎分化的最佳培养基为MS+20 mg·L-1TDZ+3%蔗糖+0.25%Phytagel。5、倍性检测(1)花药愈伤组织及其分化的根检测到单倍体细胞,而未受精胚珠愈伤组织及其分化的根未检测到单倍体细胞。(2)添加7%的蔗糖或添加0.5mg·L-1NAA+2.0mg·L-16-BA最有利于小孢子愈伤组织的形成。
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