信号转导及转录活化因子5对肺癌诊断价值的实验研究

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目的:为了检测信号转导和转录激活因子5(signal transducer andactivator of transcription5,STAT5)、癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)、细胞角蛋白19片段(Cytokeratin19fragment,Cyfra21-1)三者分别在正常人胚肺MRC-5细胞和人肺腺癌A549细胞中的表达情况,并使用受度者工作特征曲线(ROC曲线),探索STAT5能否可以对肺癌早期诊断具有重要价值。方法:1.采用免疫细胞化学SP法检测传代培养的正常人胚肺MRC-5细胞和人肺腺癌A549细胞中STAT5、CEA、Cyfra21-1蛋白表达的表达。用Olympus BX60带照相系统显微镜采集图片,使用IPP(Image-Pro Plus)6.0图像分析软件分析所采集的图片,通过计算机所测图片MOD(mean optical density,平均光密度)值判断图片染色强度,得到相应的量化值;2.利用荧光定量PCR方法检测在正常人胚肺MRC-5细胞和人肺腺癌A549细胞中STAT5mRNA、CEA mRNA、Cyfra21-1mRNA的基因表达量。通过利用ROC曲线分析在人肺腺癌A549细胞中STAT5、CEA、Cyfra21-1的蛋白及mRNA表达情况,利用曲线下面积比较三者单检与联合检测的诊断价值。结果:1.免疫细胞化学染色图片分析结果:(l)STAT5蛋白、CEA蛋白和Cyfra21-1蛋白在正常人胚肺MRC-5细胞中的表达均明显低于它们各自在人肺腺癌A549细胞中的表达,经统计学软件分析计算,它们各自在两组细胞中的表达水平差异有显著统计学意义(P<0.01)。(2)在A549细胞中分别计算STAT5、CEA、Cyfra21-1蛋白的ROC曲线下面积(Az)分别为0.766、0.771、0.749。三者的曲线下面积(Az)分别比较,三者之间差异均不具有统计学意义(P﹥0.05)。2.荧光定量PCR方法检测结果显示:(1)STAT5、CEA、Cyfra21-1和β-actin扩增之后各自的产物特异都达到较高水平;扩增效率分别为97.96%、96.77%、95.19%、97.73%。(2)STAT5mRNA、CEA mRNA、Cyfra21-1mRNA在正常人胚肺MRC-5细胞中的基因表达水平均明显低于它们各自在人肺腺癌A549细胞中的表达,经统计学软件分析之后,它们各自分别在两组细胞株中的表达差异均具有统计学意义(P<0.05)。(3)分别计算STAT5mRNA、CEAmRNA、Cyfra21-1mRNA的ROC曲线下面积(Az)分别为0.807、0.732、0.721,三者的曲线下面积(Az)分别比较,三者之间差异均不具有统计学意义。(4)计算STAT5mRNA和STAT5蛋白的ROC曲线下面积(Az)分别为0.807,0.766,两者之间的曲线下面积(Az)比较,Z=0.010,P=0.500﹥0.05,差异不具有统计学意义,推测两者对肺癌诊断价值无明显差异。3.STAT5+CEA+Cyfra21-1三项联合检测的ROC曲线下面积(Az)为0.913,而CEA+Cyfra21-1两项联合检测的曲线下面积(Az)为0.833;两种肿瘤标志物联检方法的曲线下面积(Az)比较,Z=2.583,P=0.005﹤0.05,差异有统计学意义。结论:(1)STAT5、CEA、Cyfra21-1的蛋白和mRNA在正常人胚肺MRC-5细胞中的表达均明显低于它们各自在人肺腺癌A549细胞中的表达。(2)STAT5与目前临床上常使用的肺癌标志物CEA、Cyfra21-1相比较,STAT5对早期肺癌诊断价值相等。(3)STAT5、CEA、Cyfra21-1三项标志物联合检测能显著提高对肺癌的诊断准确性。因此我们推断STAT5可以作为一种新的肺癌标志物,用与现用的标志物联合检测的方式对肺癌早期诊断具有较高的诊断价值,并推荐临床进一步研究。
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