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目的:1.研究早期肺腺癌患者基因编码区的RNA编辑现象。2.研究腺苷脱氨酶1(Adenosine Deaminases that Act on RNA 1,ADAR1)、腺苷脱氨酶2(Adenosine Deaminases that Act on RNA 2,ADAR2)和鸟氨酸脱羧酶(Ornithine Decarboxylase,ODC)在肺腺癌中表达的临床意义及预后价值。3.研究抗酶蛋白抑制因子1(Antizyme inhibitor 1,AZIN1)的RNA编辑对A549细胞增殖与转移的影响。方法:1.应用微流控芯片多重聚合酶联反应与RNA测序(microfluidics-based multiplex PCR and RNA sequencing)检测早期肺腺癌患者基因编码区的RNA编辑现象。应用荧光定量PCR(RT-q PCR)检测肺腺癌肿瘤组织与癌旁正常组织中ADAR1、ADAR2和ODC的基因表达水平。2.应用免疫组织化学染色技术检测ADAR1、ADAR2和ODC蛋白在肺腺癌肿瘤组织与癌旁正常组织中的表达,分析ADAR1与ODC在肺腺癌中表达的相关性和预后价值。3.构建稳定表达编辑型AZIN1基因的A549细胞(A549-edt/AZIN1)和稳定表达野生型AZIN1基因的A549细胞(A549-wt/AZIN1)。应用XTT实验和Transwell细胞侵袭实验,研究AZIN1的RNA编辑对于A549增殖和侵袭的影响,应用免疫印迹法检测ODC蛋白的表达水平。结果:1.相对于癌旁正常组织,肺腺癌组织的RNA编辑水平升高。在肺腺癌肿瘤组织编辑水平最高的20个基因中,在基因编码区的共涉及14个基因位点,包括:COG3,SRP9,COPA,SRP9,CACNA1D,RICTOR,ZNF669,METTL6,FLNA,AZIN1,C20orf30,PODXL,FLNB,PDZD7。2.ADAR1基因和ODC基因在肺腺癌肿瘤组织中的表达显著高于癌旁正常组织,P(27)0.05。ADAR2基因在肺腺癌肿瘤组织中的表达与癌旁正常组织无统计学差异,其中P(29)0.05。3.ADAR1蛋白定位于细胞核,呈棕黄色或棕褐色颗粒。60.4%的肺腺癌组织ADAR1高表达,而癌旁正常组织仅20.8%为高表达,两组差异有统计学意义(P(27)0.05)。ADAR1蛋白的表达与肺腺癌患者的TNM分期和淋巴结转移情况明显相关(P(27)0.05);而与性别、年龄、吸烟史、胸膜侵犯情况、肿瘤最大直径和分化程度无明显相关(P(29)0.05)。4.ADAR2蛋白定位于细胞核,呈棕黄色或棕褐色颗粒。10.4%的肺腺癌组织ADAR2高表达,而癌旁正常组织中8.3%为高表达,两组差异无统计学意义(P(29)0.05)。5.ODC蛋白主要定位于细胞质,细胞浆呈棕黄色。56.3%的肺腺癌组织ODC高表达,而癌旁正常组织仅12.5%为高表达,两组差异有统计学意义(P(27)0.05)。ODC蛋白的表达与肺腺癌患者的TNM分期明显相关(P(27)0.05);而与性别、年龄、吸烟史、胸膜侵犯情况、肿瘤最大直径、分化程度和淋巴结转移情况无明显相关(P(29)0.05)。6.经过秩相关性分析,肺腺癌患者中ADAR1与ODC的表达呈正相关(r=0.832,P(27)0.01)。生存分析显示ADAR1与ODC的表达与预后相关。Cox比例风险回归模型进行多因素生存分析显示,ADAR1蛋白表达水平、TNM分期是影响肺腺癌患者预后的独立因素。7.通过XTT实验测试A549、A549-edt/AZIN1和A549-wt/AZIN1的增殖能力。第一天,三组细胞增殖未出现明显的差异。第三天,A549-edt/AZIN1与A549-wt/AZIN1的增殖速度明显高于A549(P(27)0.05)。第六天,A549-edt/AZIN1的增殖速度明显高于A549-wt/AZIN1(P(27)0.05)。8.通过Transwell细胞侵袭实验,比较A549,A549-edt/AZIN1和A549-wt/AZIN1穿透Matrigel Invasion Chamber的侵袭能力,结果显示:A549-edt/AZIN1(477±68)穿过小室的细胞数量明显多于A549-wt/AZIN1(327±42)(P(27)0.05),即A549-edt/AZIN1的侵袭能力比A549-wt/AZIN1的侵袭能力强。9.通过Western blot检测A549-edt/AZIN1和A549-wt/AZIN1中ODC的表达量,发现A549-edt/AZIN1和A549-wt/AZIN1中ODC的蛋白表达量高于A549(P(27)0.05),且ODC在A549-edt/AZIN1的表达量高于A549-wt/AZIN1,差异具有统计学意义,P(27)0.05。结论:1.相对于癌旁正常组织,肺腺癌组织的RNA编辑水平升高。在肺腺癌肿瘤组织编辑水平最高的20个基因中,在基因编码区的共涉及14个基因位点,包括:COG3,SRP9,COPA,SRP9,CACNA1D,RICTOR,ZNF669,METTL6,FLNA,AZIN1,C20orf30,PODXL,FLNB,PDZD7。2.肺腺癌患者肿瘤组织中ADAR1与ODC的表达明显高于癌旁正常组织,二者在肺腺癌中的表达呈正相关。肺腺癌患者肿瘤组织与癌旁正常组织中ADAR2的表达无明显差异,主要为低表达。ADAR1蛋白的表达与肺腺癌患者的TNM分期和淋巴结转移情况明显相关。ODC蛋白的表达与肺腺癌患者的TNM分期明显相关。生存分析显示ADAR1与ODC的表达与预后相关。Cox比例风险回归模型进行多因素生存分析显示,ADAR1蛋白表达水平、TNM分期是影响肺腺癌患者预后的独立因素。3.编辑型的AZIN1可以促进A549的增殖与转移,同时AZIN1的高编辑状态可以上调ODC蛋白的表达。