基于蛋白组学分析的不同中药复方治疗自发性高血压大鼠的研究

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目的:通过对SHR的血压、血管功能考察,评价天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠的降压作用,结合双向电泳与Western Blot实验技术分析天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠肾脏蛋白表达的干预,探究其治疗高血压的相关机制。在此基础上,继续考察应用于高血压不同证型的半夏白术天麻汤、地黄饮子和天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠蛋白谱表达差异,并通过主成分分析综合比较,阐述三种复方的作用特点与调控通路,进而分析高血压分型治疗的理论基础。   方法:6周龄的自发性高血压大鼠(Spontaneous hypertensive rat,SHR)与正常对照大鼠(Wistar-Kyoto rat,WKY),对给药组的SHR灌胃天麻钩藤饮、半夏白术天麻汤和地黄饮子3种复方,阳性对照药为卡托普利,监测鼠尾血压变化至24周龄,对天麻钩藤饮和阳性对照药组取胸主动脉与肠系膜上动脉进行离体血管环实验,而后统一处死,提取肾脏组织蛋白并进行双向电泳实验,经PDQuest软件分析得差异蛋白点,并以串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF/TOFMS)分析蛋白结构,WesternBlot验证相关蛋白点的表达变化。对于3种不同复方干预的血压变化分析,结合肾脏蛋白表达谱以主成分分析法(Principal component analysis,PCA)考察三种不同复方对SHR的作用趋势。   结果:天麻钩藤饮在SHR高血压发病初期,具有显著的降压效果,但当病程发展至24周龄时,天麻钩藤饮和卡托普利的降压效果均不显著;离体血管环实验表明天麻钩藤饮对肠系膜上动脉舒张度改善具有优于卡托普利的作用,而对于胸主动脉作用不显著;蛋白组学实验发现SHR模型组经天麻钩藤饮干预,肾脏蛋白表达发生显著变化,检测的16个显著变化蛋白集中与内皮功能、氧化应激和能量代谢相关。其中,内皮功能相关蛋白包括4-α-氨甲喋呤脱水酶1(PCBD1)、热休克蛋白和精氨酸二甲基氨基水解酶2(DDAH2),能量代谢相关蛋白包括ATP酶F亚型、核苷二磷酸激酶B、腺苷酸激酶同工酶4、果糖双磷酸酶1、质子ATP酶催化亚基蛋白,氧化应激相关蛋白包括铜锌超氧化物歧化酶(Cu-ZnSOD)和羟基酸氧化酶2。通过WesternBlot验证,PCBD1、DDAH2和Cu-ZnSOD表达变化与双向电泳结果一致。SHR在6周龄至10周龄,血压处于持续升高状态,此时天麻钩藤饮具有良好的降压效果,当血压稳定保持较高状态时,地黄饮子与半夏白术天麻汤具有优于天麻钩藤饮的降压效果;24周龄时肾脏蛋白谱分析共找出SHR与WKY表达显著不同的84个蛋白点,结合主成分分析,累及主成分提取95.951%,发现天麻钩藤饮和半夏白术天麻汤对于SHR肾脏蛋白点的改变有显著变化趋势,且向WKY趋近,地黄饮子的作用趋势较为分散。   结论:天麻钩藤饮对于SHR的治疗作用,体现在对发病初期血压的调控及中动脉内皮舒张度的保护方面。同时,天麻钩藤饮可改善24周龄时SHR肾脏内皮功能、能量代谢与氧化应激相关的蛋白表达。3种复方对于SHR,在不同进程中有不同程度的血压调节效果,在SHR血压升高初期,天麻钩藤饮具有显著的降压效果,当血压保持稳定较高水平,地黄饮子与半夏白术天麻汤具有优于天麻钩藤饮的降压效果。半夏白术天麻汤和天麻钩藤饮对于肾脏蛋白表达的改善有向WKY回归的趋势,地黄饮子作用较为分散。
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