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研究目的:分析IRF7基因在肝癌与癌旁组织中的表达差异,并结合患者临床资料,探讨其表达与肝癌发生发展的关系;通过降低IRF7的表达,观察其对肝癌细胞生物学行为的影响,进一步了解IRF7基因影响肝癌进展的机制,从而为肝癌病变机制提供一定实验和理论依据。第一部分:IRF7在肝癌组织中的表达及与临床预后的关系实验目的:分析IRF7基因在肝癌及相应癌旁组织中的表达差异,并探讨其表达与肝癌临床预后的关系。实验方法:1、应用Western Blot及免疫组织化学方法检测IRF7在肝癌及相应癌旁组织中表达。2、结合患者临床资料,分析IRF7基因在肝癌组织中的表达与肝癌患者性别、年龄、血清AFP、肝硬化、肿瘤大小、肿瘤分期、肿瘤转移等临床相关特征之间的关系。实验结果:1、Western Blot检测结果:在所检测的40对肝癌组织及相应的癌旁肝组织中,29例(72.5%)肝癌组织中IRF7蛋白表达水平比相应的癌旁组织明显升高,11例(27.5%)癌旁组织中IRF7蛋白表达高于癌组织。2、免疫组织化学检测结果:在60例肝癌组织中IRF7高表达为65.0%(39/60),癌旁组织中高表达率为38.3%(23/60),IRF7在肝癌组织中高表达率明显高于癌旁组织高表达率,并具有统计学意义(P<0.05)。3、分析IRF7的表达与各临床参数的关系,发现IRF7的表达与肿瘤的大小、转移呈正相关,与分化程度呈负相关。结论:IRF7基因在肝癌组织中高表达,且其表达与肝癌的侵袭和恶性程度相关,在肝癌的发生发展中起到重要的作用。第二部分:IRF7表达对肝癌细胞生物学功能的影响实验目的:通过细胞实验进一步研究IRF7基因的表达对肝癌细胞增殖、周期、侵袭的影响。实验方法:1、q RT-PCR和Western Blot方法检测正常肝脏细胞株HL-7702,及不同的肝癌细胞系(Hep G2,Huh-7,Hep3B、SMMC7721,MHCCLM3)中目的基因IRF7的表达。2、RNA干扰的方法特异性抑制了肝癌细胞中IRF7基因的表达,分别应用CCK8、流式细胞仪技术、Transwell法检测降低IRF7基因表达后对肝癌细胞增殖、细胞周期、侵袭转移能力的影响。实验结果:1、q RT-PCR与Western Blot结果提示,IRF7 mRNA和蛋白表达在各肝癌细胞系中的表达均比正常肝细胞高;且在肝癌细胞株MHCCLM3中IRF7表达较其他肝癌细胞系更高。2、RNA干扰MHCCLM3肝癌细胞株中IRF7的表达,qRT-PCR和Western Blot检测IRF7在mRNA和蛋白表达水平的干扰效果,并筛选出最佳的RNA干扰系列。3、CCK8检测、流式细胞仪技术、Transwell法检测发现,降低IRF7基因的表达,肝癌细胞增殖,周期及侵袭明显受到抑制。结论:IRF7基因在肝癌细胞株高表达。IRF7的表达能够促进肝癌细胞增殖、周期及侵袭。总结:本课题通过检测肝癌组织中IRF7的表达,并分析其与肝癌患者的临床资料,发现IRF7的表达与肝癌的发生发展密切相关。同时,通过细胞生物学功能实验,证实了IRF7的表达能够促进肝癌细胞增殖、周期、转移;进一步的揭示了IRF7基因的表达在肝癌的进展中发挥了重要的作用。