拟除虫菊酯降解菌的分离、鉴定、降解性能及系统发育分析

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目前生产上广泛使用的农药按化学结构类型可以分为有机磷类、有机氯类、拟除虫菊酯类和氨基甲酸酯类。就目前的使用情况而言,拟除虫菊酯为杀虫剂中的第二大类,约占世界杀虫剂市场的20%,在我国的使用面积已占杀虫剂总施用面积的1/3以上。随着拟除虫菊酯类农药使用的日益广泛和使用时间的延长,有关菊酯类农药的残留问题及其危害也日益暴露出来,利用微生物降解这类农药已成为近年来研究讨论比较热的问题。本实验从山东大成农药股份有限公司污水曝气池中分离到D2细菌,其能以氯氰菊酯为唯一碳源生长,且能够将其降解的,经鉴定为革登菌属(Gordonia sp.),有明显的杆球变化周期,培养初期为长杆状,随着时间增加逐渐变短,老龄培养物为球形或卵圆形。所有的生理生化性状均与革登菌吻合。用气相色谱法对D2的降解性能分析表明:4天对氯氰菊酯的降解率为25%,7天降解率为42%,8天降解率为52.3%。当接种量为30%时,D2的降解效果最好,8天内降解率可以达到73.7%;pH=7、30℃时该菌的降解效果最好,外加碳源能够明显促进菌株的降解能力。D2可以利用对硝基苯酚(p-nitrophenol)、甲基对硫磷(methyl parathion)、硫丹(endosulfan)、甲氰菊酯(fenpropathrin)、甲胺磷(methamidophos)作为碳源和能源进行生长;最大耐受度分别为:氯氰菊酯1200mg/L ,甲氰菊酯800mg/L ,对硝基苯酚200mg/L ,硫丹300mg/L,甲胺磷150mg/L。菌株D2对各种常用的抗生素类药物敏感,当菌体被释放到自然环境中进行生物修复时,不会同时携带耐药因子在土著菌间传播。D2的16S rDNA序列有1482个碱基,GenBank中的注册号为DQ787430;gyrB序列有1287个碱基,注册号为DQ913892。分别以这两个基因作为进化时钟来构建系统发育树,并对建树结果进行评估,结果表明:16S rDNA应主要用于菌株的鉴定,而gyrB/GYRB更适合于系统发育分析,能够更好的反映出属内种间的进化关系。
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