背景乳腺癌是全世界三大最常见癌症之一。人表皮生长因子受体-2（Human Epidermal Growth Factor Receptor 2,HER2）是酪氨酸激酶受体（HER1-4）家族中的一员,25%～30%乳腺癌患者HER2呈过表达,这类乳腺癌预后较差。针对HER2类药物的研发一定程度上提高了乳腺癌的治疗效果。然而HER2阳性乳腺癌由于其高转移性及强侵袭性,导致这类乳腺癌仍是一种不治之症,目前急需新的治疗方案。针对HER2阳性乳腺癌,更好地理解对现有靶向HER2药物的耐药性机制、肿瘤微环境,以及相关的信号通路所起的作用,是探索新药和新方案的临床试验核心。因此构建稳定过表达HER2基因的乳腺癌细胞株来进行药物筛选与机理研究显得尤为重要。目的构建稳定过表达HER2基因的乳腺癌细胞株,探索HER2对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响,为靶向HER2治疗提供更严谨并合理的细胞模型。方法通过脂质体转染技术将携带HER2基因的质粒整合到小鼠乳腺癌细胞（Experimental Mammary Tumour-6,EMT6）中,并通过G418筛选获得HER2稳转乳腺癌EMT6的单克隆细胞株。把从中所挑选出来的单克隆细胞株扩培,总RNA提取。使用q RT-PCR、Western blot方法,检测挑选出来的细胞株中HER2的表达差异。将实验用细胞株分为3组,即EMT6组、HER2低表达组和HER2高表达组。采用免疫荧光方法检测构建的稳转细胞株中HER2的表达。分别采用CCK-8法测定EMT6、HER2低表达和HER2高表达细胞株的增殖能力,划痕实验测定EMT6、HER2低表达和HER2高表达细胞株的迁移能力,Transwell实验测定EMT6、HER2低表达和HER2高表达细胞株的侵袭能力,Western blot实验测定EMT6、HER2低表达和HER2高表达细胞株中m TOR、AKT的表达。结果1.q RT-PCR检测5株EMT6-HER2稳转细胞株HER2表达有高低的差异。以EMT6-H1为对照组,EMT6-H3表达量最高,P<0.001;EMT6-H4、H5高于EMT6-H1,P<0.01;EMT6-H2表达量低于EMT6-H1,P<0.001。2.Western blot检测细胞中HER2蛋白的表达结果与HER2 m RNA水平一致。以EMT6为参照,EMT6-H2细胞株中HER2表达高于EMT6（P<0.05）,EMT6-H1细胞株中HER2表达高于EMT6（P<0.01）;EMT6-H3、EMT6-H4、EMT6-H5细胞株中HER2表达均显著高于EMT6（P<0.001）。综合q-RT-PCR和Western blot检测结果,HER2稳转细胞株EMT6-H1为低表达组,EMT6-H3为高表达组。3.免疫荧光染色稳转细胞株中HER2的表达。HER2低表达、HER2高表达细胞均可见HER2蛋白表达荧光,并且主要分布在细胞膜上。HER2稳转细胞株中低表达组、高表达组均高于EMT6组（P<0.001）。4.CCK8法检测EMT6、HER2低表达和HER2高表达细胞株的增殖能力。HER2低表达和HER2高表达细胞株吸光值均高于EMT6（P<0.001）;HER2高表达细胞株吸光值高于HER2低表达细胞株（P<0.001）。5.划痕实验检测EMT6、HER2低表达和HER2高表达细胞株的迁移能力。HER2低表达和HER2高表达细胞株迁移率均高于EMT6细胞株（P<0.001）,HER2高表达细胞株迁移率均高于HER2低表达细胞株（P<0.01）。6.Transwell实验检测EMT6、HER2低表达和HER2高表达细胞株的侵袭能力。HER2低表达和HER2高表达细胞株穿过基质胶的细胞数均高于EMT6细胞株（P<0.001）,HER2高表达细胞株穿过基质胶的细胞数高于HER2低表达细胞株（P<0.001）。7.Western blot检测了EMT6、HER2低表达和HER2高表达细胞株中m TOR、AKT的表达情况。结果显示:HER2低表达和HER2高表达细胞株中m TOR、AKT表达均高于EMT6（P<0.001）,转染过HER2的EMT6细胞中m TOR及AKT的表达都上调。结论1.稳转EMT6株中HER2 m RNA的表达有高表达和低表达差异,HER2受体存在于细胞膜上。2.EMT6细胞的增殖、迁移、侵袭能力与HER2表达水平的高低有关。HER2高表达能促进EMT6细胞的增殖、迁移和侵袭。3.HER2高表达可促进EMT6细胞中m TOR及AKT的表达,能激活PI3K-mTOR-AKT信号通路。