论文部分内容阅读
研究背景及目的:疣状癌是一种具有特殊临床特征、生物形态学及细胞动力学特征的恶性肿瘤,1948年Ackerman首次将它作为独立的实体瘤从鳞状细胞癌中划分出来并予以命名,发生于口腔的疣状癌称口腔疣状癌(oral verrucous carcinoma, OVC)。本课题组自1992年开始对OVC进行了系列研究,2004年采用BiostarH-40S型含有3900个基因的芯片进行了OVC基因表达的初步筛选并与口腔鳞癌(oral squamo us cell carcinoma, OSCC)进行对比研究发现,OVC与自身对照正常粘膜(OVC-N)及OSCC间存在多个差异表达基因。但此前的研究芯片通量较低,为了进一步研究OVC的临床生物学特征、以及生物学行为机理,本研究应用全基因组寡核苷酸及miRNA芯片技术对OV、OSCC及其相应的癌旁(Paracancerous tissue of OVC, OVC-P、Paracancerous ti ssue of OSCC, OSCC-P)及正常口腔黏膜(normal mucosa tissue of OVC, OVC-N、normal mucosa tissue of OSCC, OSCC-N)进行了全基因组基因及miRNA表达谱构建并进行生物信息学分析;为筛选出决定OVC主要生物学行为的基因及miRNA做前期准备,为建立具有自主知识产权的OVC诊断用基因芯片奠定良好基础,并能更好的研究其与OSCC在发病机制方面的区别,以达到更好的指导临床诊断和治疗,提高OVC早期诊断率和治愈好转率的目的。方法:运用人类全基因组寡核苷酸芯片Human Genome U133Plus2.0Array以及miRNA微阵列芯片技术对5例OVC、6例OSCC及相应患者的癌旁、正常口腔黏膜组织进行全基因组表达谱及miRNA表达谱(miRNA芯片OVC补充至6例)研究,筛选出差异表达基因及差异表达miRNA。运用RT-PCR分别检测5例OVC、OSCC及相关癌旁和正常黏膜组织中MMP1、SERPINE1、MAL、DNASE1L3的表达,分析其间的表达差异,以验证芯片的检测结果。进一步运用生物信息学方法对差异基因进行二次筛选,初步探讨差异基因及miRNA的功能,并运用IPA分析软件对差异基因进行通路和基因网络调控图分析。结果:芯片杂交结果符合质控要求,RT-PCR验证结果与基因芯片结果基本一致。差异基因表达分析结果显示:OVC与OVC-N差异表达已知基因109个,其中表达上调66个,下调43个;OVC与OVC-P差异表达已知基因29个,其中表达上调18个,下调11个;OVC-P与OVC-N差异表达已知基因56个,其中表达上调26个,下调30个;OSCC与OSCC-N差异表达已知基因1172个,其中表达上调564个,下调608个;OSCC与OSCC-P差异表达已知基因949个,其中表达上调346个,下调603个;OSCC-P与OSCC-N差异表达已知基因220个,其中表达上调191个,下调29个。OSCC与OVC差异表达已知基因167个,其中表达上调108个,下调59个miRNA差异表达分析显示:OVC与OVC-N差异表达miRNA2个,均表达下调;OVC与OVC-P差异表达miRNA2个,均表达上调;OVC-P与OVC-N差异表达miRNA8个,其中表达上调2个,下调6个;OSCC与OSCC-N差异表达miRNA33个,其中表达上调22个,下调11个;OSCC与OSCC-P差异表达miRNA23个,其中表达