背景： 肺癌是世界上死亡率最高的一种恶性肿瘤,非小细胞肺癌占到了肺癌总数的80％。化疗在晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的治疗中占据主要地位,但疗效不尽如人意。由于在非小细胞肺癌中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)常存在过度表达和异常激活,且EGFR信号通路在癌症发生、发展、转移、凋亡等方面有重要作用,因此以阻断EGFR功能为目标的分子靶向治疗受到了极大的关注。吉非替尼(Gefitinib;商品名为易瑞沙,Iressa)-种EGFR相关的分子靶向药物,可以特异性的抑制EGFR自身磷酸化,阻断其信号传导,从而起到抗肿瘤作用,是第一个用于治疗非小细胞肺癌的分子靶向药物。该药用于治疗化疗失败或不适于化疗的局部晚期或远处转移的非小细胞肺癌患者,在亚裔、女性、非吸烟的腺癌患者有着较高的有效率。近年来,人们发现几乎所有对吉非替尼治疗有效的病例在经过一定时间的缓解期后会出现疾病进展,发生了耐药现象,称之为吉非替尼的获得性耐药。部分的获得性耐药(约50％)是由于EGFR基因的二次突变(T790M)所导致,然而,其余患者的耐药机制尚不清楚。目前的研究表明,酪氨酸激酶受体家族基因的异常表达与吉非替尼获得性耐药有相关性,研究较明确的是MET基因的扩增可导致人肺癌吉非替尼获得性耐药,另有研究表明IGFR和PDGFR与吉非替尼获得性耐药有相关性。阐明获得性耐药的分子机制,并在此基础上寻找逆转分子靶向药物获得性耐药的方法、开发新的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂和相关分子靶向药物成为肿瘤学领域的研究热点和前沿课题。 目的： 明确吉非替尼敏感人肺癌细胞株和获得性耐药人肺癌细胞株的吉非替尼耐药指数,研究MET基因的过度表达与吉非替尼获得性耐药的相关性,分析吉非替尼敏感人肺癌细胞株和获得性耐药人肺癌细胞株的差异表达基因,筛选吉非替尼获得性耐药相关基因,并研究酪氨酸激酶受体家族与吉非替尼获得性耐药的相关性。 方法： 实验用细胞株为吉非替尼敏感的人肺癌细胞株PC-9细胞及其衍生的三株获得性耐药细胞株PC-9/AB11细胞、PC-9/AB2细胞、PC-9/BB4细胞。 应用MTT法和台盼蓝染色计数法测定吉非替尼敏感和耐药的人肺癌细胞株的耐药指数,用流式细胞仪分析吉非替尼给药后不同细胞株的凋亡水平,应用real time PCR分析MET基因在不同细胞株的表达情况,应用基因芯片分析吉非替尼处理后吉非替尼敏感的人肺癌细胞株PC-9细胞和吉非替尼耐药的人肺癌细胞株PC-9/BB4细胞间基因表达谱差异,并分析酪氨酸激酶受体家族与吉非替尼获得性耐的相关性。 结果： 1.吉非替尼敏感和耐药的人肺癌细胞株具有不同的耐药强度。应用台盼蓝染色计数法所得吉非替尼IC50分别为PC-9: 0.011+0.0047μmol/L,为吉非替尼高度敏感人肺癌细胞株；PC-9/AB11:2.01±0.19μmol/L,为吉非替尼高度耐药的人肺癌细胞株；PC-9/AB2:0.81±0.12μmol/L吉非替尼低度耐药的人肺癌细胞株；PC-9/BB4:1.48±0.17μmol/L吉非替尼中度度耐药的人肺癌细胞株,四株细胞间耐药指数具有显著性差异(P<0.05)。 2.尽管不同实验用细胞株对吉非替尼的敏感性不同,应用大于相应吉非替尼IC50水平的药物处理72小时后,吉非替尼敏感细胞和耐药细胞均出现了显著性凋亡。 3.MET基因在吉非替尼敏感人肺癌株中低表达,在三株吉非替尼耐药人肺癌细胞株中MET基因均有过度表达现象P<0.05)。 4.在获得性耐药的人肺癌细胞株PC-9/BB4中筛选到高表达酪氨酸激酶受体家族基因包括第一类生长受体家族:ERBB4;第三类血小板衍生的生长因子受体家族:PDGFRL;第四类纤维细胞生长因子受体家族:FGFR1,FGFR2：第五类受体:EPHA10,EPOR.第七类肝细胞生长因子受体:MET。并有酪氨酸激酶受体家族的特性配体基因和底物蛋白基因表达增高。 结论： 吉非替尼敏感的人肺癌细胞株及其衍生的吉非替尼获得性耐药细胞株具有不同的吉非替尼IC50,获得性耐药细胞的吉非替尼IC50明显增高。MET基因和其他酪氨酸激酶受体家族及其配体基因在吉非替尼获得性耐药细胞株中有过度表达,MET基因和其他酪氨酸激酶受体家族相关基因的过度表达可能与吉非替尼的获得性耐药有关。