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本课题利用高速逆流色谱技术结合溶剂萃取及超临界CO<,2>萃取等前处理技术,成功地从茶多酚粗提物中分离制备其功能成分EGCG单体,其单体纯度经高效液相色谱法分析达到95%。
高速逆流色谱建立在一种特殊的流体动力学平衡基础上,利用螺旋管的高速行星式运动产生的不对称力场,实现两相溶剂体系的充分保留和有效混合及分配,从而实现物质在两相溶剂中高效分离。利用高速逆流色谱技术不仅能制备高纯度组分单体、获得很高的回收率及重现性,还能消除传统色谱因溶质与固体固定相担体作用而产生的不可逆吸附,具有极高的应用价值。
EGCG单体具有抗肿瘤、抗突变、抗衰老等多种功效,对心脑血管疾病具有显著的预防功效,近年来,逐渐显示出广阔的应用前景。
利用茶多酚中EGCG单体与其他成分在乙酸乙酯中的溶解度差异,采用多级溶剂萃取,在上样进行高速逆流色谱分离之前,对茶多酚粗提物进行前处理。在实验过程中,曾尝试利用超临界CO<,2>萃取技术脱除样品中的咖啡碱成分,但效果不佳。茶多酚粗提取经多级溶剂萃取后,其总酚含量经UV检测,从43.5%提高到91.3%,达到国家标准TPⅡ要求。同时,目标成分EGCG单体含量经HPLC检测,也从15.84%提高到了26.09%。
通过参考前人大量的文献资料结合HPLC测定成分在互不相容溶剂体系上下相中分配系数的方法来选择确定适宜的高速逆流色谱分离精制茶多酚中EGCG单体的溶剂体系为乙醚-乙酸乙酯-水(4:10:25,v:v)。
采用选定的溶剂体系,优化了分析与半制备高速逆流色谱仪分离精制EGCG单体的主要工艺参数条件(温度,转速,流速),确定理想工艺参数条件为,高速逆流色谱仪循环水温度35℃,移动相流速2.5mL/min,螺旋管分离柱转速800r/min(正转)。采用选定溶剂体系及理想工艺参数条件,上样300mg经前处理得到的茶多酚制品,在8个小时内获得了4个组分部位,其中一个部位经HPLC分析确定为EGCG单体且纯度高于95%。
研究结果表明,利用分析与半制备型高速逆流色谱仪能够成功分离制备EGCG单体,有效地解决了茶多酚中EGCG单体难以规模化高纯度制备的难题,对EGCG单体制备的工业化具有一定的指导意义。