层析是生物大分子分离纯化的有效方法,层析分离的效率直接受介质孔结构的影响,其中孔径分布尤为重要。逆体积排阻层析法是一种测定多孔材料孔径分布的新方法,比传统方法(如气体吸附法、压汞法等)拥有更多优势,特别适合于亲水软性凝胶层析介质。本文综述了逆体积排阻层析法表征孔结构的原理和特点,建立并采用该方法测定了一系列层析介质的孔径分布。首先,分析了逆体积排阻层析法中常用的数学模型,采用两种孔径分布模型和单孔分配系数模型,得到由孔径分布函数计算分配系数的模型表征,并进行了模型分析。结果表明,利用对数正态孔径分布模型能够有效克服高斯正态分布出现孔径为负数的情况；孔径分布参数中,rp值变化对Kd-Rm曲线的影响非常明显,而Sp变化对Kd-Rm曲线的影响则较小,因此用该方法算得的rp值相较Sp值更准确。然后,建立了逆体积排阻层析法测定层析介质孔径分布的实验方法,并验证了该方法的可行性和可靠性。结果表明,逆体积排阻层析法是分析层析介质孔径分布的有效方法,可靠性高,且可以进一步计算得到可进入孔表面积等重要信息。接着,应用逆体积排阻层析法测定了多种常用琼脂糖层析介质的孔径分布,并进行了详细比较和深入分析。结果表明,FF系列琼脂糖凝胶基质平均孔径随琼脂糖浓度降低而增大；偶联不同配基的FF系列离子交换介质孔径分布非常接近,且与基质凝胶的孔径分布差异不大；XL系列离子交换介质的孔径比FF系列明显小且分布窄,HP系列离子交换介质孔径比FF系列略大且分布宽。最后,对天然多糖类和有机合成树脂类层析介质的孔径分布进行了比较分析,并测定了本实验室自制的几种纤维素层析介质的孔径分布。结果表明,不同公司生产的以6%交联琼脂糖为基质的FF系列离子交换介质,其孔径分布差异不大；所测定的纤维素介质的平均孔径较小,但是否为普遍规律还有待进一步验证；有机合成树脂类离子交换介质的平均孔径整体上明显大于多糖类离子交换介质,分布也更宽；实验室自制的六种纤维素层析介质的孔径分布较窄,两种扩孔剂均有扩孔效果,淀粉的扩孔效果较环已烷好。