【摘 要】
：
目的:1.探究VX-765对Apo E敲除小鼠动脉粥样硬化进程的作用。2.探究血管平滑肌细胞焦亡与动脉粥样硬化的关系,并明确VX-765对血管平滑肌细胞焦亡的作用。3.为动脉粥样硬化疾病提供可能的干预措施。方法:体内实验:两批不同基因背景的8周龄的Apo E敲除小鼠,一组在高脂饮食8周后,确认动脉粥样硬化斑块已经形成,再给予VX-765（一种caspase-1特异性抑制剂,50mg/kg/d）和溶
论文部分内容阅读
目的:1.探究VX-765对Apo E敲除小鼠动脉粥样硬化进程的作用。2.探究血管平滑肌细胞焦亡与动脉粥样硬化的关系,并明确VX-765对血管平滑肌细胞焦亡的作用。3.为动脉粥样硬化疾病提供可能的干预措施。方法:体内实验:两批不同基因背景的8周龄的Apo E敲除小鼠,一组在高脂饮食8周后,确认动脉粥样硬化斑块已经形成,再给予VX-765（一种caspase-1特异性抑制剂,50mg/kg/d）和溶剂（含0.5%甲基纤维素钠和0.1%tween-80,蒸馏水配）分别灌胃（干预性实验）;另一组自高脂饮食起就给予VX-765（50mg/kg/d）和溶剂（含0.5%甲基纤维素钠和0.1%tween-80,蒸馏水配）分别灌胃（预防性实验）。达到预订时间后,分别取小鼠血浆、全主动脉及心脏。用试剂盒检测血脂,用油红O染色检测全主动脉及主动脉根部的脂质负荷,用免疫荧光检测主动脉根部切片中的血管平滑肌细胞标志物（α-SMA）和焦亡相关指标（cleaved caspase-1（p10）和IL-1β）,用HE染色检测主动脉根部动脉粥样硬化病变范围。体外实验:1.离体人颈动脉斑块:用免疫组化及HE染色检测人颈动脉斑块中血管平滑肌细胞标志物（α-SMA）、巨噬细胞标志物（CD68）和焦亡相关指标（cleaved caspase-1（p10）和IL-1β）的分布和表达。2.细胞实验:处理1:脱分化的血管平滑肌细胞用无血清的DMEM/F12处理12h后,再用不同浓度的ox LDL或Dil-ox LDL（0,10,25,50μg/ml）处理24h。用荧光显微镜观察Dil-ox LDL处理血管平滑肌细胞后,细胞吞噬ox LDL的情况;用PI/Hoechst33342染色及乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测细胞破裂坏死;用caspase-1活性试剂盒检测caspase-1活性;用TUNEL及caspase-1免疫荧光共染检测细胞核断裂及caspase-1激活;用Elisa检测细胞外液中IL-1β的释放;用蛋白免疫印迹检测焦亡相关指标（NLRP3,ASC,pro-caspase-1,cleaved caspase-1（p20）,pro-IL-1β,cleaved IL-1β）以及凋亡相关指标（caspase-3,cleaved caspase-3）的表达;用免疫共沉淀检测NLRP3和ASC的结合情况。处理2:脱分化的血管平滑肌细胞分别转染NLRP3-si RNA和ASC-si RNA12h后,再用ox LDL（50μg/ml）处理24h,用蛋白免疫印迹检测焦亡相关指标（pro-caspase-1,cleaved caspase-1（p20）,pro-IL-1β,cleaved IL-1β）,LDH释放实验检测细胞坏死情况。处理3:脱分化的血管平滑肌细胞用VX-765（50μM）预处理2h后,与ox LDL（50μg/ml）共孵育24h。用PI/Hoechst33342染色及LDH释放实验检测细胞破裂坏死;用caspase-1活性试剂盒检测caspase-1活性;用蛋白免疫印迹检测焦亡相关指标（NLRP3,ASC,pro-caspase-1,cleaved caspase-1（p20）,pro-IL-1β,cleaved IL-1β）。结果:1.VX-765极大地抑制了Apo E敲除小鼠全主动脉及主动脉根部的脂质负荷,抑制了已经形成的动脉粥样硬化斑块的进展,并延缓了动脉粥样硬化的发生,但对血浆脂质水平影响不大。2.在人颈动脉斑块中,平滑肌细胞标志物（α-SMA）与焦亡相关指标（cleaved caspase-1（p10）和IL-1β）在斑块表面,坏死核心以及斑块内出血处均有重叠。在小鼠斑块中,cleaved caspase-1（p10）和IL-1β阳性细胞与α-SMA阳性细胞主要在斑块表面存在共定位,且共定位的细胞数与高脂饮食时间呈正相关。3.ox LDL通过激活NLRP3炎症小体诱导血管平滑肌细胞焦亡。4.VX-765可以抑制ox LDL诱导的血管平滑肌细胞焦亡以及Apo E敲除小鼠斑块内活性IL-1β的表达。结论:1.VX-765延缓了Apo E敲除小鼠动脉粥样硬化的进程。2.血管平滑肌细胞焦亡存在于人以及小鼠的斑块中,并参与小鼠动脉粥样硬化。3.VX-765通过抑制血管平滑肌细胞焦亡延缓动脉粥样硬化进程。4.Caspase-1可能成为治疗动脉粥样硬化疾病的另一潜在靶点。
其他文献
4G时代移动支付迅猛发展,中国成为全球领先的移动支付国家。随着5G时代的到来,移动支付将被应用于更多新场景。对于通信行业,移动支付的流行为其发展新的营业模式带来了机遇和挑战。此背景下,探究移动支付对异质性用户群体通信消费的影响,能深入理解移动支付对用户行为产生影响的内在机理,为用户提供更优质的服务。本文基于因果分析技术,挖掘了移动支付对异质性群体通信消费的因果效应,构建了移动支付因果效应估计与通信
目的:1.构建基于R语言的药物经济学评价Markov模型及成本效用分析的一般方法,为进行更加灵活、透明和易于复现的药物经济学评价提供方法依据。2.基于PROFILE 1014临床试验,从中国医疗卫生系统角度出发,对诊断为间变淋巴瘤激酶（ALK）重排阳性的晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者,比较克唑替尼和基于铂类的传统化疗（顺铂/卡铂+培美曲塞）两种治疗方案的成本效果性,为克唑替尼治疗ALK阳性晚期
背景及目标:随着生活水平的提高和生活方式的改变,非酒精性脂肪肝病（non-alcoholic fatty liver disease）已成为全球发病率最高的肝脏疾病,可进展为肝硬化、肝癌等严重疾病;其发病机制复杂,目前无有效临床治疗药物。牛奶脂肪球表皮生长因子8（milk fat globule-EGF factor 8,MFGE8）是乳汁脂肪球表面的亲脂性糖蛋白,据报道,细胞外MFGE8可调控细
目的:本文拟制备具有缓释作用的姜黄素微囊,对其制备工艺进行考察,对优化的微囊进行表征,考察姜黄素及姜黄素微囊的体外释放和体内药动学研究,并考察姜黄素微囊的稳定性,探讨单凝聚法制备微囊的优势。方法:采用单凝聚法制备姜黄素微囊,利用UV法测定姜黄素含量,以统计权重为考察指标,采用正交试验优选最佳制备工艺。对姜黄素微囊进行形态与粒径表征。利用透析法进行体外释放实验,比较姜黄素及姜黄素微囊体外释药的差异。
背景:心肌梗死（心梗,MI）是指冠状动脉缺血缺氧而导致心肌坏死。心脏是人体泵血器官,心肌坏死不仅可引起急性心力衰竭,还可能引发恶性心律失常,给生命带来威胁。约有20%的MI患者被诊断为重度抑郁症,抑郁导致的自主神经系统功能失衡可反过来作用于心血管系统,影响患者预后。中药参松养心胶囊（参松养心）临床上常用,具有活血通络的作用,能有效地减少心肌梗死患者的室性心律失常,改善心功能。探讨参松养心对心梗后抑
肾脏纤维化是几乎所有慢性和进行性肾病终末阶段的共同病理表现,其特征为损伤、炎症、肌成纤维细胞活化和迁移以及细胞外基质沉积和重塑。JNK相关的亮氨酸拉链蛋白（JNK-associated leucine zipper protein,JLP）是JNK相互作用蛋白（JNK-interacting protein,JIP）家族成员,广泛存在于多种细胞中,为信号传导模块中的多种蛋白分子、转录因子等提供附着
目的:电除颤是治疗恶性室性心律失常的主要手段,而其主要副作用是电击引起疼痛或心肌结构性损伤。心脏光遗传学提供了一种利用光能控制心脏且不会引起疼痛的方法,本课题组前期工作证明光照可以终止离体小鼠心脏的室性心动过速,但尚未进行光遗传学除颤动物在体实验研究。本研究旨在构建基于急性心肌梗死的快速性室性心律失常病理模型,通过动物在体实验证明光遗传学技术终止室性心动过速/心室颤动（室速/室颤）的有效性和探索最
目的:将载有转录因子Tbx18的腺病毒转染至升主动脉平滑肌细胞,观察重编程细胞功能和表型的改变,探讨转录因子Tbx18在体外对升主动脉平滑肌细胞的重编程作用。方法:采用组织块贴壁法培养升主动脉平滑肌细胞（VSMCs）,贴壁4～7天后在光学显微镜下观察细胞形态,细胞传代后随机分为Null组（空白组）、GFP组（对照组）、Tbx18组,Tbx18组转染携带Tbx18和GFP腺病毒,GFP组转染等量GF
背景心肌梗死（myocardial infarction,MI）是心血管疾病导致死亡的主要原因之一,是威胁人类生命的危重疾病。危及生命的室性心律失常（VAs）,例如心室颤动（VF）和持续性室性心动过速（VT）,是心肌梗死的主要致死原因之一。心肌梗死后对VAs易感性的增加主要是由于心室组织不良的结构和电重构所致。其中心肌梗死后炎症的过度激活是导致心室组织发生不良结构重构和电重构的重要原因之一。经典的
目的:Gbas（glioblastoma amplified sequence）,也称为Nipsnap2,属于Nipsnap家族,定位于细胞线粒体,在氧化磷酸化中起作用。Gbas在心脏中富集,但其在心肌肥厚中相关作用未有报道。本研究旨在基于非靶向代谢组学（LC-MS/MS）技术分析探讨Gbas是否通过参与线粒体三羧酸循环影响心肌肥厚进展。方法:第一部分:构建全身Gbas基因敲除小鼠模型。8周龄小鼠