本课题分两部分进行。第一部分体外细胞实验在过氧化氢诱导乳鼠心肌细胞损伤的基础上，观察丹参酮ⅡA预处理后对心肌细胞是否有保护作用。第二部分采用大鼠心肌缺血再灌注作为体内氧化应激诱导心肌凋亡模型，观察在手术前两周给予丹参酮ⅡA是否有抑制凋亡的作用，并探讨其可能的作用机制。 一丹参酮ⅡA对过氧化氢诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用 研究目的：建立过氧化氢诱导乳鼠心肌细胞损伤模型，在此基础上研究丹参酮ⅡA对心肌细胞损伤是否具有保护作用。 研究方法：采用本室建立的改良法培养乳鼠心肌细胞，并建立过氧化氢损伤乳鼠心肌细胞模型，以细胞存活率、细胞形态学、DNA亚二倍体峰面积、DNAladder为指标评价过氧化氢对心肌细胞的损伤状况，并观察给予丹参酮ⅡA预处理2小时后上述心肌损伤指标的变化。 结果：1.MTT实验结果显示，0.2mM-0.8mM过氧化氢对乳鼠心肌细胞的损伤呈浓度依赖性，其中0.2mM，0.4mM过氧化氢对细胞的损伤呈时间依赖性，给予10-5、10-6丹参酮ⅡA预处理2小时可剂量依赖性地抑制0.2mM，0.4mM过氧化氢对心肌细胞的损伤。 2.从DNA凝胶电泳结果可看出，0.1，0.2，0.4mM过氧化氢可剂量依赖性地诱导心肌细胞凋亡，10-5M，10-6M丹参酮ⅡA能减少DNAladder的形成，抑制凋亡的发生。其中10-5M丹参酮ⅡA的作用强于10-6M丹参酮ⅡA。 3.通过观察细胞形态学改变，Hochest33342核染色改变以及DNA亚二倍体凋亡峰面积变化进一步验证，10-5M丹参酮ⅡA能够部分抑制0.4mM过氧化氢导致的心肌细胞损伤和凋亡发生。 结论：1.利用本室建立的乳鼠心肌细胞改良法成功分离和培养乳鼠心肌细胞，并在此基础上成功地以过氧化氢为刺激因素体外模拟氧化应激诱导心肌细胞的损伤模型； 2.丹参酮ⅡA对过氧化氢导致的心肌细胞损伤具有保护作用。 二丹-参酮ⅡA对大鼠心肌缺血再灌注诱导心肌凋亡的影响 研究目的：为了进一步确定丹参酮ⅡA的抗凋亡作用，本部分研究在大鼠冠状动脉左前降支缺血再灌注损伤的基础上观察丹参酮ⅡA对心肌损伤和凋亡的影响及其可能的机制。 研究方法：1.将大鼠分为五组，分别为假手术组、缺血再灌注模型组、丹参酮ⅡA高剂量组+缺血再灌注组、丹参酮ⅡA中剂量组+缺血再灌注组、丹参酮ⅡA低剂量+缺血再灌注组。手术前两周，假手术组和缺血再灌注组每天按10ml/kg灌胃给予0.5％CMC-Na，丹参酮ⅡA高中低剂量分别按60mg/kg、30mg/kg、15mg/kg剂量灌胃给药。 2.检测Caspase-3裂解活性亚型P17蛋白的表达，建立心肌缺血再灌注诱导凋亡模型的实验方案。 3.通过组织HE染色观察缺血再灌注后心脏组织病理改变以及丹参酮Ⅱ对其的影响。采用TUNEL检测断裂DNA以及westernblot检测Caspase-3P17活性蛋白表达的方法观察丹参酮ⅡA是否具有抑制心肌凋亡的作用。 4.采用检测血清SOD活性以及MDA水平的方法，探讨丹参酮ⅡA抗心肌凋亡作用是否和其抗氧化作用有关。 5.采用westernblot方法检测各组大鼠心脏组织Bcl-2、Bax的表达，探讨丹参酮ⅡA抗心肌凋亡作用是否和Bcl-2、Bax蛋白表达改变有关。 结果：1.大鼠冠状动脉左前降支缺血45分钟再灌注120分钟可使心肌组织Caspase-3蛋白裂解成17KD的活性亚型。 2.高剂量和中剂量丹参酮ⅡA可明显改善缺血再灌注心肌组织病理改变。 3.高剂量和中剂量丹参酮ⅡA可将缺血再灌注组TUNEL阳性细胞率由19.37％分别降至5.33％和8％。低剂量丹参酮ⅡA心肌TUNEL阳性率和缺血再灌注组相比差异无统计学意义。三个剂量丹参酮ⅡA均未能使心肌Caspase-3裂解成17KD的活性亚型。 4.高剂量和中剂量丹参酮ⅡA可提高血清SOD活性和降低MDA水平，和缺血再灌注组相比差异有统计学意义。此外它们还可以上调Bcl-2蛋白的表达。低剂量丹参酮ⅡA上述指标的改变和缺血再灌注组相比差异无统计学意义。Bax蛋白表达在各实验组之间差异均不明显。 结论：1.大鼠冠状动脉左前降支缺血45分钟再灌注120分钟可诱导心肌凋亡。2.丹参酮ⅡA可减少大鼠冠脉缺血再灌注诱导的心肌凋亡。 3.丹参酮ⅡA对心肌缺血再灌注的保护作用可能和丹参酮ⅡA提高机体清除氧自由基能力、抑制脂质过氧化反应以及上调Bcl-2蛋白表达的作用有关。