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烟草是我国重要的经济作物,马铃薯Y病毒(PVY)是烟草上的主要病害之一,近几年,PVY在我国烟草主要产区爆发成灾,并且存在逐年加重的趋势。目前生产上对于PVY的防治尚无有效的药剂,因此,培育抗PVY的烟草品种是防治该病害最为有效的办法。然而,了解病毒与烟草相互作用的分子机理是解决这一问题的关键。研究表明,microRNA(miRNA)在调节植物对病毒的抗性方面具有重要作用,本文在探究PVY侵染对植物内源miRNA表达的变化的基础上,探索是否可以通过调控内源niRNA基因的表达从而起到抗病毒作用,为烟草的病毒防治和抗病育种提供一个新的思路。本研究获得的主要研究结果如下：1.对PVY侵染烟草样品及健康对照进行了小RNA(smallRNA,sRNA)测序,通过分析PVY侵染后烟草内源miRNA表达谱的变化,表明PVY能够显著影响烟草内源81个miRNA表达发生变化,其中上调表达niRNA57个,下调表达21个,对表达差异的niRNA进行靶基因预测。2.选择表达显著上调的烟草nta-mR156g、nta-miR396b、nta-miR169a、nta-miR6149a,显著下调的nta-miR6019a以及表达差异不显著的nta-miR168a、nta-miR172c进行Northern印迹杂交验证,杂交结果与测序及差异分析结果基本一致。3.筛选出nta-miR396b作为本文的研究对象,构建了nta-miR396b基因超量表达的植物表达载体,通过农杆菌介导的遗传转化,将nta-miR396b转入烟草栽培品种“K326”中,获得了转基因植株。将转基因植株自交至T2代,用于后期研究。4.对T2代转基因烟草以未转基因植株作为对照进行PVY的抗病性鉴定,结果表明,转基因烟草的发病延缓,症状较未转基因烟草明显减弱,证实烟草miR396b具有抗PVY侵染的功能。本研究从miRNA的角度寻找PVY的防治途径,证明了烟草内源miRNA具有抗PVY侵染的功能。表明植物能以调节内源miRNA表达的方式间接抵抗病毒的侵染这一相互关系的存在,为植物抗病毒研究提供了新的思路。