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背景:miR-206/miR-613在转录后水平调控OATP1B1的表达与功能;LncRNA HOTAIR可作用于miR-206/miR-613调节其靶基因表达,引起对应的功能改变;然而LncRNA HOTAIR对miR-206/miR-613调控OATP1B1是否起作用尚属未知。目的:本文章旨在揭示LncRNA HOTAIR通过miR-206/miR-613对OATP1B1表达的调控作用及其分子机制,为阐明OATP1B1调控机制增添新的内容,对临床进一步研究药物反应的个体差异提供理论基础和科学依据。方法:1.在HepG2细胞中,瞬时转染miR-206/miR-613 mimics及inhibitors,构建miR-206/miR-613过表达和抑制表达细胞模型,采用RT-q PCR、WB技术,研究miR-206/miR-613对OATP1B1 m RNA、蛋白表达的影响。2.在HepG2细胞中,瞬时转染pc DNA3.1-HOTAIR、HOTAIR Smart Silencer和pc DNA3.1、HOTAIR Smart Silencer NC,构建LncRNA HOTAIR过表达和抑制表达细胞模型,采用RT-q PCR、WB技术,研究LncRNA HOTAIR对miR-206/miR-613表达的影响及对OATP1B1 m RNA、蛋白表达的影响。3.在HepG2细胞中,瞬时共转染LncRNA HOTAIR+miR-206/miR-613,进一步确认miR-206/miR-613在LncRNA HOTAIR调控OATP1B1中的作用。4.在HEK-293T细胞中,采用双荧光报告基因法,瞬时共转染miR-206/miR-613 mimics和LncRNA HOTAIR报告基因质粒,研究LncRNA HOTAIR和miR-206/miR-613的特异性结合;瞬时共转染pc DNA3.1-HOTAIR或HOTAIR Smart Silencer与OATP1B1报告基因质粒,研究LncRNA HOTAIR调控OATP1B1表达的分子机制。结果:1.与对照组相比,瞬时转染miR-206/miR-613 mimics,OATP1B1的蛋白表达量下降38.6%和61.1%;瞬时转染miR-206/miR-613 inhibitors,OATP1B1的蛋白表达量增加67.4%和72.8%;而瞬时转染miR-206/miR-613 mimics或inhibitors时OATP1B1 m RNA表达均无变化;以上结果提示,miR-206/miR-613是在转录后水平表现出明显地降低OATP1B1蛋白表达作用。2.瞬时转染pc DNA3.1-HOTAIR,miR-206/miR-613 m RNA的表达降到对照组的0.45/0.34倍;与对照组相比,OATP1B1蛋白表达量增加103.5%;瞬时转染HOTAIR Smart Silencer,miR-206/miR-613 m RNA的表达增至对照组的1.95/1.87倍;与对照组相比,OATP1B1蛋白表达量降低43.1%,而瞬时转染pc DNA3.1-HOTAIR或HOTAIR Smart Silencer,OATP1B1 m RNA表达无明显变化。已然显示,过表达或抑制LncRNA HOTAIR亦是在转录后水平调控OATP1B1的;LncRNA HOTAIR对miR-206/miR-613 m RNA的表达显现出负性调节作用。以上结果提示LncRNA HOTAIR可能是通过作用于miR-206/miR-613进一步调控OATP1B1表达。3.瞬时共转染pc DNA3.1-HOTAIR+miR-206/miR-613mimic,与对照组相比,OATP1B1蛋白表达量下降13.3%和18.6%;瞬时共转染HOTAIR Smart Silencer+miR-206/miR-613 inhibitor,OATP1B1蛋白表达量增加46.9%和30.9%。由此可见,过表达或抑制LncRNA HOTAIR对OATP1B1蛋白表达的激活或抑制作用,可被miR-206/miR-613 mimics或miR-206/miR-613 inhibitors部分逆转,切实佐证LncRNA HOTAIR对OATP1B1的调控作用是通过靶向miR-206/miR-613实现的。4.瞬时共转染miR-206/miR-613 mimics和pmir/HOTAIR-WT报告基因,荧光素酶活性下调50%或57%,而突变含有miR-206/miR-613与LncRNA HOTAIR3’-UTR的结合位点2186bp-2207bp/2186bp-2205bp的23个碱基,再共转染miR-206/miR-613 mimics和pmir/HOTAIR-Mut报告基因,荧光素酶活性无明显变化,表明LncRNA HOTAIR与miR-206/miR-613之间确实存在特异性结合。5.瞬时共转染pc DNA3.1-HOTAIR或HOTAIR Smart Silencer和p GL/OATP1B1-WT报告基因后,荧光素酶活性上调100%或下调54.3%;而突变miR-206/miR-613与OATP1B1 3’-UTR结合的精确位点590-597nt,再共转染pc DNA3.1-HOTAIR或HOTAIR Smart Silencer和p GL/OATP1B1-Mut报告基因,荧光素酶活性却无明显变化;进一步确定,LncRNA HOTAIR可阻遏miR-206/miR-613在OATP1B1 3’-UTR结合位点上,转录后调控OATP1B1的蛋白表达。结论:LncRNA HOTAIR可通过特异性吸附miR-206/miR-613,阻止其作用于特定位点,从而影响OATP1B1蛋白表达水平。