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滥用饲用抗生素而导致的动物源性食品安全问题,成为目前国人关注的热点,而研发安全无毒的饲用抗生素替代品已迫在眉捷!中草药在我国具有历史悠久、资源丰富、功能全面、毒副作用小、无残留等优势,为了寻找能够替代饲用抗生素的中草药,本课题首先广泛筛选具有选择性抑菌效果的中草药,再根据筛选结果进行组方,与抗生素进行药效比较,并对获得的中草药方剂进行初步的安全性评价。主要研究方法及结果如下:1、选择性抑菌中草药筛选试验研究。本文以乌梅等30味中草药为原料,筛选具有选择性抑制致病菌生长作用的中草药。采用水提法和超声波处理浸提药材中有效成分,制成浓度为0.5g/mL的水溶液,采用牛津杯法对大肠杆菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌进行体外抑菌试验,以抑菌圈直径作为评价指标,筛选广谱性抑菌中草药;采用亨盖特厌氧滚管法对动物嗜酸乳杆菌和双歧杆菌进行体外抑菌试验,以菌落数目和抑菌率为评价指标,筛选不影响两种益生菌生长的中草药。试验结果表明,具有良好选择性抑菌作用的中草药为香薷、野菊花、柴胡、连翘、生地和黄柏。2、选择性抑菌中草药组方试验研究。根据选择性抑菌中草药筛选试验结果,选择不同特点的中草药按质量比随机配伍组合,制成浓度为0.5g/mL的复方制剂,分别对6种受试菌种进行药物敏感性试验,根据抑菌圈大小及抑菌率综合比较出更优复方组合。试验结果显示,按质量比乌梅30%、马齿苋15%、大青叶10%、野菊花15%、鱼腥草5%、柴胡10%、黄柏5%、香薷5%、生地5%制成的中草药复方选择性抑菌效果最佳,可有效抑制致病菌而不影响益生菌生长。3、复方中草药选择性抑菌效果研究。以头孢拉定、阿莫西林、诺氟沙星等三种抗生素为对照,比较上述获得的中草药复方制剂的选择性抑菌效果,考核中草药制剂作为抗生素替代物的可行性。结果表明,中草药复方浓度为0.5g/mL的条件下,与浓度为35ppm的头孢拉定对大肠杆菌及肠炎沙门氏菌的抑菌圈、诺氟沙星对肠炎沙门氏菌及鼠伤寒沙门氏菌的抑菌圈大小无差异,作为替代物具有可行性。中草药制剂对益生菌不敏感,较抗生素无抑制功效,其中中草药制剂在10-7～10-5菌液梯度下对双歧杆菌的负抑制率较空白组增长达2倍,对菌种无抑制作用。4、复方中草药的急性毒性试验。对中草药复方制剂进行急性毒性试验,采用最大耐受量法观察灌胃后7d小鼠生长状态及体重变化。试验中无小鼠死亡,生长状态正常,体重变化平稳。测定出最大耐受剂量(MTD)为20g/kgbw,依据急性毒性(LD50)剂量分级表可判定所选中草药制剂为无毒物,属安全制剂。结论:中草药按质量比乌梅30%、马齿苋15%、大青叶10%、野菊花15%、鱼腥草5%、柴胡10%、黄柏5%、香薷5%、生地5%。制成的复方制剂较抗生素有较好选择性抑菌功效,且安全无毒,可作为抗生素的替代物,为后续临床试验研究奠定了基础。