【摘 要】
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本研究从新鲜千层塔茎段分离、纯化内生真菌；根据菌落形态和孢子等形态特征,结合核糖体基因居间序列（ITS序列）进行菌株鉴定。从千层塔的茎中分离和鉴定出4种内生真菌,分别为枝状枝孢霉、产黄青霉、尖孢镰刀菌和盾壳霉。并对4种内生真菌进行产石杉碱甲的筛选。结果表明：产黄青霉内生真菌SHB在适宜的实验条件下可以发酵合成宿主植物相同的活性成分—石杉碱甲。以内生真菌SHB为出发菌株,采用微波、紫外线、亚硝酸和硫
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本研究从新鲜千层塔茎段分离、纯化内生真菌；根据菌落形态和孢子等形态特征,结合核糖体基因居间序列（ITS序列）进行菌株鉴定。从千层塔的茎中分离和鉴定出4种内生真菌,分别为枝状枝孢霉、产黄青霉、尖孢镰刀菌和盾壳霉。并对4种内生真菌进行产石杉碱甲的筛选。结果表明：产黄青霉内生真菌SHB在适宜的实验条件下可以发酵合成宿主植物相同的活性成分—石杉碱甲。以内生真菌SHB为出发菌株,采用微波、紫外线、亚硝酸和硫酸二乙酯对千层塔内生真菌孢子进行诱变。诱变孢子悬液通过在PDA平板继代培养2次,把单菌落孢子转接至PD培养液中进行发酵培养,利用高效液相色谱检测发酵液,筛选出一株遗传稳定,产石杉碱甲能力较高的高产菌株wB3。其发酵产物中石杉碱甲为原始菌株的3.04倍。为提高千层塔产黄青霉属内生真菌液体发酵产石杉碱甲的产量,通过单因子和正交试验优化了真菌SHB液体发酵的条件。结果表明,千层塔内生真菌wB3液体发酵产石杉碱甲的适宜条件为：温度为28℃,起始pH为6.4,接种量为12%,种龄为48h,转速为160r／min和发酵时间为8d。在此条件下,石杉碱甲的产量可达4.761μg／mL。千层塔内的内生真菌SHB和突变菌株wB3的发酵液中的菌丝体提取真菌基因组DNA,并应用随机引物扩增多态性DNA技术（Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD）进行遗传分析和比较。结果表明：使用随机引物PCR扩增后,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测发现s450、s452等引物的PCR产物中,在突变菌株wB3和原始菌株SHB之间可以找到明显的差异特征带,为产石杉碱甲功能基因的寻找奠定基础。
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