基于hTERT启动子的表达Apoptin基因重组腺病毒对前列腺癌细胞的体内、外抑制作用研究

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如其它癌症一样,前列腺癌是一个复杂的疾病,不同的治疗方法在特殊的患者群体中会产生不同的治疗效果,在美国每年大约有29,000名前列腺癌患者死于转移性疾病,因此需要探寻一种有效的治疗方法来控制前列腺癌的进展,近年来随着分子生物学、免疫学和其他相关学科的发展,基因治疗作为一种有效地治疗前列腺癌的方法,其显示了巨大的发展优势。腺病毒载体用于癌基因传递最为广泛;而特异性和疗效是这个治疗方法的主要瓶颈。在现有的腺病毒技术中,实用的具有条件复制型腺病毒(CRCAs)提供了一个最佳的方法。在我们以前的研究中,利用RAPAd.I系统,我们构建了一个双特异性重组腺病毒,Ad-hTERTp-E1a-Apoptin是由肿瘤特异性启动子hTERTp和特异性抗癌基因Apoptin组成。这个条件复制型腺病毒的主要作用是具有抑制肿瘤特异性生长和肿瘤特异性复制。细胞凋亡经常使人类肿瘤细胞受损,它是一个重要的化疗诱导的肿瘤细胞死亡的机制。因此,对于癌症的治疗,细胞凋亡通过对促凋亡和抗凋亡蛋白的调节可作为一个强有力的和有效的方法。Apoptin是一种来源于鸡贫血病毒的蛋白,它可以诱导许多变形的细胞发生凋亡,而对正常细胞没有作用。hTERT启动子在大多数人类癌症中显示出了较高活性,而非宿主组织。它被认为是一个理想的肿瘤特异性溶瘤腺病毒调节器,hTERT启动子可以用于控制病毒基因调节,如腺病毒中的E1A基因,它可以限制溶瘤腺病毒在恶性细胞和组织中的复制,双特异性腺病毒启动子可以调节E1A在多种刺激下做出表达。肿瘤特异性启动子既能允许肿瘤特异性复制和调节E1A基因表达,也可以在一些肿瘤细胞复制。然而,这些病毒启动子元素结合成一个单一的病毒来调节E1A表达和病毒复制,hTERT启动子在超过90%的肿瘤中表达,其使用溶瘤病毒,结合这两种功能在广泛的人类肿瘤和肿瘤细胞群都有可能诱发溶瘤细胞的活动。在最近几年,基于使用溶瘤腺病毒的肿瘤基因治疗已被广泛用于临床前和临床试验。本研究探讨基于hTERT启动子的表达Apoptin溶瘤腺病毒Ad-hTERTp-E1a-Apoptin对前列腺癌细胞的体内、外抑制作用。通过对感染重组腺病毒的前列腺癌细胞PC-3和RM-1运用96hMTT法,检测了重组腺病毒Ad-hTERTp-E1a-Apoptin对前列腺癌细胞PC-3和RM-1的抑制作用;分别应用AO/EB染色法、DAPI染色法、AnnexinV检测法对感染重组腺病毒48h的PC-3和RM-1进行相应的染色,分析了Ad-hTERTp-E1a-Apoptin对前列腺癌细胞PC-3和RM-1的抑制方式;通过Caspase检测方法测定了重组腺病毒对前列腺癌细胞PC-3和RM-1的抑制方式。结果显示:除Ad-CMV-EGFP外,Ad-hTERTp-E1a-Apoptin、Ad-CMV-Apoptin和Ad-hTERTp-E1a-EGFP均不同程度地表现出对前列腺癌细胞PC-3和RM-1的抑制作用,其中Ad-hTERTp-E1a-Apoptin、Ad-hTERTp-E1a-EGFP的抑制作用普遍强于Ad-CMV-Apoptin3倍(P<0.05);且Ad-hTERTp-E1a-Apoptin抑制作用具有一定时效和剂效关系趋势,48h抑制效率最佳。Ad-hTERTp-E1a-Apoptin可通过诱导凋亡途径抑制前列腺癌细胞PC-3和RM-1的增殖,致PC-3和RM-1细胞磷脂膜外翻、细胞核皱缩、细胞膜通透性增加、Caspase酶活性增强。在动物模型实验中,显示Ad-hTERTp-E1a-Apoptin可明显抑制肿瘤的生长和延长动物的寿命,提示Ad-hTERTp-E1a-Apoptin在前列腺癌基因治疗中具有潜在的应用价值。
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