NADPH氧化酶4在脑出血后线粒体氧化应激与神经元焦亡中的作用及分子机制研究

来源 :南方医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a67826766
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
研究背景脑出血(ICH)常伴有活性氧(ROS)诱导的氧化应激反应,这会引起持续的继发性脑损伤(SBI),例如神经元死亡、血脑屏障受损等。有报道称ROS可直接触发神经元的死亡。由于大多数ROS是在线粒体中产生的,因此,抑制线粒体ROS的产生对减少ICH后的氧化应激引起的神经元细胞的死亡至关重要。NADPH氧化酶4(NADPH Oxidase 4,NOX4)是唯一在组织中可直接激活产生ROS而不需要簇状亚基调控的NADPH氧化酶亚型。然而,在脑出血后,NOX4是否介导线粒体ROS产生和神经元细胞的死亡尚不清楚。在本研究中,我们发现ICH诱导了 NOX4的表达增加,而NOX4的升高主要发生在神经元细胞中,最终引发神经元焦亡。通过构建腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)敲减NOX4,线粒体内ROS的生成明显减少,最终脑出血后的线粒体损伤得到缓解,神经元焦亡减少。此外,我们还发现,敲减NOX4后神经元细胞氧化应激反应减轻,并伴随对氧化应激耐受力的增强。最后,我们使用线粒体特异性ROS抑制剂(Mito-TEMPO)作为线粒体反向作用于NOX4的方式来治疗ICH,我们发现Mito-TEMPO抑制了 NOX4的表达和神经元焦亡,作用与敲减NOX4相似,这预示着NOX4很可能是抑制线粒体内ROS生成的重要靶点。总之,我们的研究表明,敲减NOX4可抑制线粒体内的ROS生成,减少脑出血后的神经元焦亡,同时增强了神经元对氧化应激的耐受力。研究目的明确NOX4在脑出血后神经元焦亡中的作用,从ROS产生的源头——线粒体入手,减少NOX4介导的ROS产生,阻断因ROS造成神经元焦亡的可能途径。通过实验证明脑出血后抑制NOX4的表达,是否可减少线粒体内的ROS产生,对神经元焦亡产生影响。研究方法利用立体定位技术构建大鼠脑出血模型并检测大鼠脑出血后NOX4表达;免疫荧光明确大鼠脑出血后NOX4的细胞空间定位;尼氏染色检测大鼠脑出血后神经细胞的死亡情况;透射电镜观察大鼠脑出血后神经元细胞的具体改变;利用腺相关病毒和shRNA-NOX4构建稳定可靠的AAV-NOX4,敲减大鼠脑内NOX4;利用Western Blot、免疫荧光、尼氏染色、透射电镜等实验技术对比敲减前后神经元及其线粒体的变化;通过Western Blot、免疫荧光染色等技术探寻其中所涉及的相关通路。研究结果1.NOX4在脑出血后脑组织中明显升高,且在72小时达到峰值。NOX4的升高与出血灶周围组织脑水肿严重程度成正比,其升高主要发生在神经元;2.敲减大鼠脑内NOX4,出血后脑水肿缓解,血脑屏障通透性下降;3.敲减大鼠脑内 NOX4,通过抑制 caspase1/GSDMD-N及 caspase4/11/GSDMD-C两条通路抑制神经元焦亡;4.敲减大鼠脑内NOX4,脑出血后脑组织内的ROS产生明显下降,并通过Nrf2/Keap-1通路增强神经元对氧化应激的耐受性;5.敲减大鼠脑内NOX4,线粒体内NOX4表达明显降低,神经元线粒体内的ROS生成明显减少,神经元线粒体损伤得到缓解;6.使用线粒体ROS特异性抑制剂Mito-TEMPO治疗脑出血后,脑出血后的NOX4生成受到抑制,神经元的焦亡明显减少,血脑屏障损伤减轻。结论1.NOX4的表达在脑出血后升高且与脑水肿严重程度成正比;2.2.脑出血后NOX4的升高主要定位于神经元;3.敲减大鼠脑内NOX4可有效缓解出血后脑水肿,保护血脑屏障;4.敲减大鼠脑内NOX4可降低大鼠脑出血后的神经元焦亡;5.敲减大鼠脑内NOX4可有效缓解大鼠脑出血后的氧化应激反应,并增强神经元对氧化应激的耐受性;6.敲减大鼠脑内NOX4可减轻大鼠脑出血后神经元线粒体损伤,缓解了脑出血后ROS不断叠加的恶性循环;7.Mito-TEMPO可抑制脑出血后NOX4的升高,减少神经元焦亡,NOX4可能是其作用位点。
其他文献
研究背景:子宫具有重要的生物学功能,其中子宫内膜为胚胎的植入和生长发育提供了合适的微环境。严重的子宫内膜损伤,如医源性损伤、宫内感染和药物因素,通常会导致宫腔粘连(IUA),甚至进一步发展为不育症,这已成为一个日益严重的公共健康问题。目前,临床上已有多种治疗方案,包括宫腔镜宫腔粘连切除术(TCRA),物理屏障(避孕装置,子宫内气囊装置,Foley气囊等)和使用激素药物,可在临床治疗中改善子宫内膜损
学位
背景与目的:法医学实践工作中,微量、混合以及降解等疑难检材日益成为检案工作的重点与难点问题。实现对疑难检材的有效检测及成功分型,对案件中未知个体(常为犯罪嫌疑人)的最终甄别与举证具有重要意义。此外,新型案件的层出不穷以及犯罪嫌疑人数量的逐年累积,也让传统的基于STR数据库比对的侦查方式陷入僵局。在常规STR分型无法获得满意的分型结果时,利用有限的生物检材获得更多嫌疑人相关的身份信息(例如容貌信息、
学位
树立正确的劳动观念,理解劳动的意义和价值,主动积极劳动,对正在成长的高中生来说至关重要。诗歌是很好的劳动教育素材,在大单元背景下,可用情境体验的方式鉴赏诗歌,用讲故事的方式建立文本之间的联系,用写作的方式建立诗歌与生活的联系,层层深入,达到劳动教育的目标,实现语文学科核心素养的提升。
期刊
背景:现有研究和临床实践已表明,缺血性脑卒中后诱发局部神经炎症级联反应,极大地影响患者预后。越来越多的研究强调了肠道微生物群及其代谢物作为环境影响因素对缺血性脑卒中预后的重要性。但目前作为具有免疫活性的吲哚衍生物在缺血性卒中的作用研究仍不清楚。因此我们用急性大脑中动脉栓塞(Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO)小鼠模型评估吲哚丙酸(Indole-3-propi
学位
研究显示盐酸布比卡因可导致糖尿病小鼠背根神经节的损伤,然而尚未有有效防治药物和措施。本研究通过使用黄芪多糖预处理,在动物和细胞水平探讨黄芪多糖对盐酸布比卡因所致糖尿病小鼠背根神经节神经元的保护作用及机制。目的1.通过在体动物实验,探索黄芪多糖预处理对盐酸布比卡因所致糖尿病小鼠背根神经节神经元的影响;2.通过离体细胞实验,探索黄芪多糖预处理对盐酸布比卡因所致高糖培养环境中ND7/23细胞的影响。方法
学位
研究背景由创伤、肿瘤和其他原因造成的大面积骨缺损的修复仍然是骨组织工程中一个巨大的挑战。骨缺损区域的缺血和缺氧使种子细胞难以存活和分化,从而未能形成有效的组织再生。因此,使用释氧生物材料是近年来开发的一种解决方案,以确保向骨缺损区持续供应营养物质和氧气。但是,目前固体无机过氧化物的应用,包括过氧化钙、过碳酸钠和过氧化镁,仍然面临一些棘手的问题,如降解速度过快,机械强度差,成型困难,需要二次加工等。
学位
无精子症是导致男性不育的重要因素,约占男性总人口的1%。在一些不育男性中,圆形精子细胞是睾丸活检中可见的最成熟的单倍体细胞,圆形精子细胞注射(Round spermatid injection,ROSI)技术的发展可以帮助他们拥有自己的后代。尽管ROSI技术在临床应用上已有诸多研究,但存在诸如着床率低、流产率高、活产率低等问题。为了提升ROSI胚胎发育效率,通过筛选178个小分子化合物,我们筛选到
学位
动脉粥样硬化部位的脂质不断沉积与炎症反应加剧,促进了动脉粥样硬化斑块(Atherosclerotic plaque,AP)形成与破裂,继而可造成致命的心脑血管事件。目前针对AP治疗所用的临床药物多为全身用药以改善血脂异常与AP内炎症反应。但受限于AP封闭的病理环境,全身用药难以使药物在AP内蓄积,因此无法减小或逆转已形成的AP。并且长期全身用药存在着严格的剂量限制与累积毒副作用。针对药物在AP内难
学位
研究背景:瘢痕疙瘩是临床上常见的一种发生于皮肤创伤后,由多种病理机制介导的伤口修复异常而形成的病理性瘢痕。瘢痕疙瘩的特点是成纤维细胞过度增殖,以及细胞外基质成分(尤其是胶原蛋白)过度聚积。瘢痕疙瘩在真皮和皮下组织呈过度生长,扩展超出了原始创面的范围,并持续性侵犯邻近正常皮肤组织,皮损呈红色或暗红色瘤样增生、隆起。瘢痕疙瘩治疗效果往往不佳,且存在较高的复发率。瘢痕疙瘩不仅会对患者的外观造成影响,还会
学位
研究背景脯氨酸/丝氨酸丰富的卷曲螺旋蛋白1(proline/serine-rich coiled-coil protein 1,PSRC1)是一种在细胞有丝分裂及生长过程中发挥重要作用的微管相关蛋白,被报道与血脂、冠脉狭窄程度及冠心病风险有关。我们前期工作发现:过表达PSRC1可抑制高脂饮食apoE-/-小鼠的泡沫细胞形成,抑制炎症通路,进而延缓动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)
学位