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目标:脑卒中是一种常见的神经系统疾病,在世界范围内具有较高发病率并且是造成永久性致残的主要原因之一。由于重组组织纤溶酶原激活剂的有效治疗时间窗较窄,且存在副作用,极大地限制了缺血性脑卒中溶栓治疗的疗效。因此,迫切需要新的治疗方法,使临床医生和研究人员克服上述副作用,延长现有药物的治疗时间窗。环状RNAs(circular RNAs,circ RNAs)在中枢神经系统中表达丰度高,并且被证实参与调控多种生理和病理过程。然而,circ RNAs在卒中病理进程中的潜在作用仍然未知。因此,本研究将致力于探寻circ HECTD1(circular RNA HECTD1)在脑卒中发病机制中的作用,为寻找脑卒中有效的治疗靶点提供研究基础。方法:应用高通量芯片筛选技术,研究短暂性大脑中动脉闭塞(transient middle cerebral artery occlusion,t MCAO)模型小鼠脑梗死及周边区circ RNA和m RNA表达特征;应用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测circ HECTD1在t MCAO模型小鼠脑梗死及周边区以及急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)病人血浆中表达水平;应用核磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)和氯化三苯基四氮唑(Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色技术检测t MCAO模型小鼠脑梗死体积;应用RNAhybrid和Target Scan等生物信息学分析软件预测,预测circ HECTD1、mi R-142、TIPARP三者之间调控关系;通过western blot实验检测GFAP、TIPARP、LC3B-Ⅱ、p62、Beclin-1表达;通过pull-down和原位杂交实验验证circ HECTD1与mi R-142相互结合关系;通过荧光素酶报告基因实验验证mi R-142与TIPARP的结合关系;应用侧脑室脑微注射与慢病毒转染技术,结合免疫荧光染色和western blot实验,分别在整体和离体水平验证circ HECTD1/mi R-142/TIPARP对缺血再灌注诱导的星形胶质细胞活化的作用。结果:通过circ RNA芯片筛选发现,circ HECTD1在t MCAO脑卒中模型小鼠脑梗死及周边区以及AIS患者血浆样本中表达水平显著升高。生物信息学分析发现,circ HECTD1由HECTD1基因的第23和第24外显子构成,并且存在mi R-142结合位点。通过m RNA芯片筛选发现,mi R-142下游靶基因-TIPARP在t MCAO模型小鼠脑梗死及周边区表达上调。抑制circ HECTD1表达可显著降低t MCAO模型小鼠梗死体积,并降低神经功能损伤评分。通过实验进一步证实,circ HECTD1可以作为内源性mi R-142海绵抑制mi R-142活性,在氧糖剥夺/再灌注情况下敲低circ HECTD1,可以显著抑制TIPARP表达,进而通过抑制过度自噬减少星形胶质细胞活化。结论:本研究揭示了circ HECTD1的调节机制,circ HECTD1通过靶向mi R-142-TIPARP通路调节自噬介导的星形细胞活化。特异性抑制circ HECTD1表达有望成为抑制脑卒中患者星形胶质细胞活化的潜在治疗靶点。