【摘 要】
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鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestiferr,RA)是属于黄杆菌科的革兰氏阴性菌,是引起鸭和其它家禽传染性浆膜炎和败血症的病原菌。本次试验将研究Feo系统在鸭疫里默氏杆菌转运
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鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestiferr,RA)是属于黄杆菌科的革兰氏阴性菌,是引起鸭和其它家禽传染性浆膜炎和败血症的病原菌。本次试验将研究Feo系统在鸭疫里默氏杆菌转运亚铁离子过程中的作用,以及缺失Feo系统对鸭疫里默氏杆菌定殖能力的影响。主要试验结果如下:1 RA ATCC 11845株feoA,feoB和feoAB基因缺失株及回补菌株的构建分别将feoA、feoB和feoAB基因的上下游约800 bp的同源臂及红霉素抗性基因片段用PCR扩增并融合,融合的基因片段通过自然转化的方法导入RAATCC 11845菌株中,再用红霉素抗性筛选及PCR鉴定,成功构建了RA ATCC11845(35)feoA,RA ATCC 11845(35)feoB和RA ATCC 11845(35)feoAB菌株。随后,将feoA,feoB和feoAB基因克隆至穿梭质粒pFY02,将重组质粒通过结合转移的方法转入相应缺失菌株中,成功构建相应的回补菌株。2 RA ATCC 11845株Feo系统的功能鉴定在TSB,含有60μmol/L Dip(二价铁离子螯合剂)的TSB和含有40μmol/L EDDHA(三价铁离子螯合剂)的TSB液体培养基中培养RA ATCC 11845亲本株,feoA,feoB和feoAB基因缺失株及相应回补株。结果表明,在TSB和含有60μmol/L Dip的TSB液体培养基中亲本株,缺失株及回补株生长状态无明显区别。然而,在含有40μmol/L EDDHA的TSB液体培养基中缺失株生长明显慢于亲本株。推测,Feo系统参与了亚铁离子的转运。用50μg/mL的链黑霉素和10mmol/L的H2O2分别处理RA ATCC 11845亲本株和feoAB基因缺失株及相应回补株发现,缺失株存活率明显高于野生株。说明鸭疫里默氏杆菌Feo系统参与了亚铁离子的转运过程。3 RA ATCC 11845株Feo系统缺失株对雏鸭体内定殖的影响取RA ATCC 11845亲本株和feoAB基因缺失株各109CFU混匀,通过肌肉注射感染雏鸭,一天后分别对雏鸭的血液,脑和肝组织的细菌计数,发现在雏鸭血液,脑和肝组织中RA ATCC 11845亲本株的定殖量明显高于feoAB基因缺失株,所以RA ATCC 11845的Feo系统缺失株在雏鸭体内的定殖能力降低。
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