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目的探究白藜芦醇(resveratrol,RSV)联合人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UCMSCs)对裸小鼠颅骨缺损修复作用的影响。方法体外实验:经过家属同意,在无菌条件下留取足月儿刨宫产脐带组织15-20cm,采用胶原酶、胰酶消化法从脐带中分离提取细胞,并对其培养、传代,倒置相差显微镜下观察细胞形态,采用流式细胞仪鉴定其表面标记物,使用可吸收性明胶海绵(以下简称为明胶海绵)作为细胞支架材料,将细胞与明胶海绵支架材料共培养3d,扫描电镜下观察细胞与明胶海绵支架材料复合物的表面形态及细胞生长情况;体内实验:将SPF级裸小鼠,18只,适应性喂养1w,在无菌条件下,每组每只裸小鼠在右侧颅顶骨均制造4×4 mm的颅骨缺损模型,随机分为3组,明胶海绵对照组:将没有浇细胞的明胶海绵支架材料单独植入裸小鼠的颅骨缺损区域,不做任何干预;h UCMSCs组:将h UCMSCs及明胶海绵支架材料复合物植入到裸小鼠的颅骨缺损区域,给予RSV的对照溶剂(生理盐水+DMSO)30mg/kg/d干预8w;RSV+h UCMSCs组:将h UCMSCs与明胶海绵支架材料复合物植入到裸小鼠的颅骨缺损区域,给予RSV 30mg/kg/d药物干预8w;于实验的第8w末处死实验动物取颅骨组织采用Micro CT做影像学评价;采用HE染色、改良Masson三色染色及免疫组织化学染色检测SIRT1、RUNX2、OCN的表达做组织学评价。统计学分析:应用Image Pro Plus图像分析软件对SIRT1、RUNx2、OCN的染色结果进行半定量检测,结果用积分光密度(Integral optical density,IOD)的Sum值表示。实验中获取的实验数据用均值±标准差(x±s)表示,使用SPSS19.0软件对所得数据进行单因素ANOVA分析,用P<0.05表示差异具有统计学意义。结果1倒置相差显微镜下显示:2代的h UCMSCs呈均一的梭形,平行或漩涡状排列。2 h UCMSCs的流式细胞仪检测鉴定结果显示:h UCMSCs高表达间充质干细胞标记CD73-APC(99.9%)、CD90-FITC(99.8%)CD105-APC(98.5%);不表达造血细胞标记HLA-DR-FITC(0.1%)、CD45-FITC(0.1%)、CD34-FITC(0.0%)、CD11b-FITC(0.0%)、CD19-FITC(0.0%)。3 h UCMSCs与明胶海绵支架材料复合物的扫描电镜结果显示:明胶海绵呈三维立体结构,各个孔隙之间相互连接交织成网,孔径约200-400,孔隙率为97%,细胞生长黏附于明胶海绵表面。4裸小鼠颅骨骨片影像学Micro CT结果显示:RSV+h UCMSCs组与h UCMSCs组;h UCMSCs组与明胶海绵对照组;RSV+h UCMSCs组与明胶海绵对照组的BV值、BV/TV值具有显著性差异,差异具有统计学意义(P<0.05);实验数据的三维立体重建结果显示:RSV+h UCMSCs较h UCMSCs的裸小鼠颅骨缺损区周围骨质增厚,呈不规则地向中心生长,明胶海绵对照组的颅骨缺损区周围骨质较锐利。5 HE染色结果显示:RSV+h UCMSCs组:在骨缺损周围可见淡粉色的新生骨向中心生长,h UCMSCs组:在骨缺损周围可见少量淡粉色的新生骨附着于缺损区两端,明胶海绵对照组:在骨缺损周围几乎不见淡粉色的新骨形成,RSV+h UCMSCs组较h UCMSCs组和明胶海绵对照组,新骨形成量明显增多。6改良Masson三色染色结果显示:RSV+h UCMSCs组较h UCMSCs组和明胶海绵对照组的骨胶原形成量明显增多。7免疫组织化学(IHC)染色结果显示:RSV+h UCMSCs组和h UCMSCs组较明胶海绵对照组的SIRT1、RUNX2的阳性细胞数的表达明显增多,差异具有统计学意义(P<0.05)RSV+h UCMSCs组较明胶海绵对照组OCN阳性细胞的表达明显增多,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论1成功构建可吸收性明胶海绵作为细胞支架材料与人脐带间充质干细胞的生物复合,并证明可用于裸鼠颅骨缺损的修复。2白藜芦醇联合人脐带间充质干细胞能够促进裸小鼠颅骨缺损的修复。3白藜芦醇联合人脐带间充质干细胞可增加SIRT1的表达及成骨标志性基因RUNX2和OCN的表达,可能是促进h UCMSCs的骨修复作用机制之一。