姜黄素抑制单核细胞浸润并减少单核细胞来源GRN分泌抗肝纤维化的机制研究

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cnviy
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
第一部分单核细胞分泌GRN活化HSCs促进肝纤维化机制研究目的:肝纤维化(liver fibrosis)是多种慢性肝病进展的共同病理过程,是我国严重的公共卫生问题。近年来研究表明巨噬细胞,特别是单核细胞来源的巨噬细胞可以促进肝纤维化,但其机制仍不清楚。最新研究显示巨噬细胞可以分泌颗粒体蛋白(granulin,GRN)促进纤维化。本研究旨在揭示巨噬细胞及GRN促进肝纤维化的机制,为肝纤维化的治疗寻求新的靶点。方法:首先我们检测了121例慢性肝病患者CLD肝脏中GRN表达,分析GRN与肝脏炎症、纤维化、临床肝病指标的关系,以及在不同原因肝病患者中的表达差异;然后,我们通过腹腔反复注射CCl4和胆管结扎的方式建立小鼠肝纤维化模型,检测不同纤维化模型小鼠不同时期肝脏中GRN表达变化;利用GRN-/-小鼠建立肝纤维化模型,探索GRN对肝纤维化的作用;利用GRN与肝星状细胞(Hepatic Stellate Cells,HSCs)系-LX-2共培养,通过q-PCR检测平滑肌肌动蛋白α2(smooth muscle actin alpha 2,ACTα2)和I型胶原α1(collagen type I alpha l,Collα1)等指标,观察GRN对HSCs活化的影响,通过WB检测ERK1/2、P-38、JNK、AKT和NF-κB等蛋白表达和磷酸化水平,探索GRN活化HSCs的机制;利用GRN与巨噬细胞表面分子CD68、F4/80和CD11b荧光共染,观察在肝纤维化期肝脏中GRN表达来源;利用脂质体尾静脉注射去除掉小鼠肝巨噬细胞,观察去除掉巨噬细胞后小鼠肝脏中GRN表达;利用野生型小鼠和GRN-/-小鼠的骨髓单核细胞和肝脏原代HSCs共培养,观察单核细胞来源的巨噬细胞对小鼠肝星状细胞的活化作用。结果:在CLD患者肝脏中GRN表达较普通人明显升高,且与肝脏炎症呈正相关,不同病因之间无明显差异。与CLD患者肝脏临床指标相关性分析发现,肝组织内中GRN+细胞数量与谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷氨酰转肽酶(glutamyl transpeptidase,GGT)、总胆红素(total bilirubin,Tbill)、Child-Pugh评分呈正相关,与白蛋白水平无明显的相关性。在CC14腹腔反复注射和胆管结扎这两种小鼠肝纤维化模型中,GRN表达随着CC14腹腔注射次数增加和胆管结扎时间延长明显增加。在CC14腹腔反复注射建立小鼠肝纤维化模型中,与野生型小鼠相比,GRN-/-小鼠肝脏中α-SMA和Col-1表达明显减轻,炎症因子白介素(interleukin,IL)-4和IL-10降低。GRN与LX-2共培养后,LX-2表达ACTα2和Collαl明显增加,而且ERK1/2和STAT3磷酸化水平明显增加。在CLD患者肝组织免疫荧光中,GRN与CD68共染较普通人明显增多。在普通小鼠肝脏中GRN主要与F4/80荧光共染,而纤维化小鼠模型中GRN与CD11b共染明显增多。相比于普通人CLD患者肝组织切片显示,CD68+细胞数量明显升高。肝纤维化小鼠模型中,F4/80+和CD11b+细胞数量也较空白对照组明显升高。与野生型小鼠相比,GRN-/-小鼠骨髓单核细胞来源的巨噬细胞活化HSCs作用明显减轻。结论:肝纤维化过程中,GRN表达明显升高,与肝脏炎症和纤维化密切相关。拮抗GRN作用后,HSCs活化减轻和肝纤维化缓解。而GRN活化HSCs的作用,与ERK1/2和STAT3磷酸化有关。肝纤维化过程中,GRN主要由单核细胞来源的巨噬细胞分泌。单核细胞来源的巨噬细胞可以通过分泌GRN促进HSCs活化,加重肝纤维化。第二部分姜黄素抑制单核细胞浸润减轻肝纤维化的机制研究目的:既往研究发现姜黄素具有良好的抗肝纤维化作用,但其作用机制尚不清楚。近年来有研究显示姜黄素具有抑制趋化因子分泌和单核细胞浸润的作用。在本研究中,我们旨在研究姜黄素是否可以通过抑制库普弗细胞(Kupffer cells,KCs)活化来减少趋化因子的分泌,从而抑制Ly6Chi单核细胞浸润以及Ly6Chi单核细胞相关的促纤维化细胞因子分泌来缓解肝纤维化。方法:24只小鼠被随机分为三组:空白组、CCl4组和姜黄素组。其中CCl4组和姜黄素组予以CCl4腹腔注射,每周两次,连续四周。空白组小鼠相应予以橄榄油腹腔注射。CMC-NA溶液重悬姜黄素。姜黄素组小鼠每日予以姜黄素灌胃,连续四周,空白组和CCl4组予以相应体积的CMC-NA溶液灌胃。结果:姜黄素给药后,纤维化模型小鼠肝脏炎症和纤维化明显减少。与CCl4组比较,姜黄素组小鼠Ly6Chi单核细胞的肝内浸润明显减少,但其他白细胞亚型无差异。姜黄素显著降低Ly6Chi单核细胞相关促炎性和促纤维化细胞因子分泌,与肝内Ly6Chi单核细胞数量减少相一致。进一步的研究发现姜黄素能够降低KCs活化和肝内单核细胞趋化因子分泌,这解释了姜黄素为什么可以减少肝纤维化过程中的Ly6Chi单核细胞浸润。细胞实验中我们发现姜黄素抑制巨噬细胞向M1型的极化,减少单核细胞趋化因子MCP-1和CCL7的分泌。这与姜黄素抑制ERK1/2和p38通路蛋白磷酸化有关。结论:综上所述,我们首次证实姜黄素可以通过抑制KCs活化来减少趋化因子的分泌,从而抑制Ly6Chi单核细胞浸润以及Ly6Chi单核细胞相关的促纤维化细胞因子分泌来缓解肝纤维化。这些结果提示姜黄素可以作为预防和治疗肝纤维化的候选药物。
其他文献
目的:观察邵氏“五针法”对哮喘模型大鼠血清中α-SMA和FN表达的影响,探讨邵氏“五针法”治疗哮喘的作用机理。方法:将40只SD大鼠按照随机数字表随机分为4组,每组10只。药物
正向迁移理论的普遍语法、认知策略、无知假设、最小方案等主要观点可以应用于英语教学,提高教学效率,从而提高学习者的学习成绩和实际应用能力。
目的:观察左甲状腺素片治疗妊娠合并甲状腺功能减退症的效果及对妊娠结局的影响效果.方法:随机选取2016年10月-2018年10月期间我院收治的妊娠合并甲状腺功能减退症患者60例,
为了引领学生走进他们感到可望而不可即的地理世界,为了培养他们的想象力,我们可以借他山之石——影视资源来辅助地理教学,以期达到更好的教学效果。本文所说的影视资源是指
市场经济是一种以强胜弱,以智胜愚的充满竞争的经济,一个不具备竞争能力的企业很难在市场上生存发展,也很难找到立足之地。市场竞争就如同市场战争,是以胜败为结果,因此有时是非常
带二维装载约束的车辆调度问题大量存在于现代物流活动中,该问题是二维装箱问题与车辆路径问题这两个经典难题融合之后的一个新问题.针对这一问题,在综合考虑客户需求、时间
过去,传统广电新闻人认为:好新闻一定是以内容为王,可是随着app客户端、微信公众号、微博等新媒体和自媒体的出现,只有内容而没有到达力,就会变成业内人士的自娱自乐——&#39
通信电子电路是电子信息类专业的基础课程,实践性很强。课程组针对本课程传统实验教学中学生被动按步骤实验、主动性不强的问题,设计了案例式模块化实验方案。以无线收发系统
大豆的发芽处理可提高其营养特性,与小麦粉混合后可强化小麦粉营养。本文考察了未发芽和发芽豆粉对面团流变学特性及面条品质的影响。结果表明:豆粉的加入对面粉灰分、湿面筋
<正>骨性关节炎(osteoarthritis,OA)是一种以关节软骨的变性、破坏及骨质增生为特征的慢性关节病。骨性关节炎属中医学"骨痹"范畴。骨关节炎可以分成原发性和继发性两种。原