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目的:通过对中药水煎剂蠲痛饮与PI3K通路抑制剂LY294002干预子宫内膜异位症模型大鼠的对比,探讨蠲痛饮干预PI3K/Akt/mTOR通路对子宫内膜异位症发生发展的作用机制,以期为中医药防治子宫内膜异位症提供新思路,为现代科学理论阐明中医药作用机理提供一个良好的切入点。方法:本课题以SD大鼠为研究对象,通过自体子宫内膜移植方法建立子宫内膜异位症大鼠模型,观察不同剂量蠲痛饮水煎剂对模型大鼠的影响。1大鼠造模选择有正常动情周期的雌性大鼠为研究对象,按体重随机分为6个组,每组8只,分别为正常假手术组、模型对照组、蠲痛饮高剂量组、蠲痛饮中剂量组、蠲痛饮低剂量组和西药(LY294002)组。除正常组行开腹假手术外,其余各组均复制成子宫内膜异位症模型,造模术后4周开腹探查并取异位组织行病理学检查,证实造模成功。2分组给药正常组:术后4周起按照1ml/100g给予生理盐水大鼠灌胃,1次/d,给药4周;模型组:术后4周起按照1ml/100g给予生理盐水大鼠灌胃,1次/d,给药4周;蠲痛饮高、中、低剂量组在术后4周起按照成人临床用药量等效量的4、2、1倍分别给予42.9g、14.3g、4.8g/kg灌胃,给药4周;西药组:造模后5周开始以LY294002溶于DMSO后腹腔注射,以0.04g/kg进行计算,每周腹腔注射一次,给药4周。3指标检测分组灌胃给药4周后,禁食12小时,经乙醚麻醉,腹主动脉采血后处死。观察和测量大鼠异位病灶的组织形态及体积大小,剖取大鼠在位及异位子宫内膜组织分别置于液氮、4%多聚甲醛、电镜固定液中备用。应用透射电镜、elisa、免疫组织化学及real-timepcr法等现代分子生物学技术检测大鼠血清中il-1β、tnf-α、vegf、mmp-2的含量及在位内膜和异位内膜组织中pi3k、akt、mtor蛋白的表达及p70s6kmrna的相对含量。结果:1各组大鼠一般情况观察造模术后前三日,大鼠给予青霉素肌注预防感染,活动量减弱,部分大鼠毛发杂乱无光泽,伤口处偏湿润,给予局部碘伏消毒处理;造模术后4-9日,大鼠给予补佳乐水溶液(戊酸雌二醇)灌胃,部分出现腹胀、摄食量减少、排泄物以水质居多;造模术后10日至术后四周,大鼠给予正常喂养,体重增加明显,少数大鼠出现腹部伤口开线裂开,根据实际情况予以消毒或重新缝合处理。正常组假手术组大鼠毛发光洁整齐,眼睛有神,饲养期间无明显不良反应,其他模型组大鼠毛发脏乱,部分行动减慢,神态倦怠,双目无神,间断有摄食量下降的情况。其中,蠲痛饮高剂量组因为中药灌胃呛入气管致死1只。2各组大鼠子宫异位内膜光镜及透射电镜观察各组用药4周后异位内膜组织光镜下病理学图片如附录中实验性图片2.5所示,正常组子宫内膜腺体细胞排列整齐,腺体及间质细胞生长良好;模型组及蠲痛饮低剂量组腺体数目明显增多,大部分上皮细胞可见核下空泡,间质细胞较密集,有明显的新生血管生成,蠲痛饮高剂量组及西药组异位内膜腺体数目减少,间质细胞减少,或可见纤维化。各组大鼠子宫异位内膜透射电镜图像如附录中实验性图片2.1所示,正常组细胞内细胞器正常;模型组腺上皮细胞排列相对整齐,具备微绒毛,细胞胞浆形态基本正常;蠲痛饮高剂量组和西药组观察腺上皮细胞萎缩或欠整齐,微绒毛减少或消失,细胞胞核固缩,线粒体可见减少,并且有凋亡的间质细胞;蠲痛饮低剂量组腺上皮细胞排列不规则,微绒毛减少,胞浆中可见线粒体肿胀。3各组大鼠血清tnf-a、mmp-2、vegf、il-1β含量比较检测结果显示,与正常组大鼠相比,模型组和蠲痛饮低剂量组的血清tnf-a、mmp-2、vegf、il-1β含量均有显著升高,与其有显著性差异,具有统计学意义(p<0.05),而与蠲痛饮中、高剂量及西药组相比无明显差异(p>0.05);与模型组对比,中、高剂量、西药组干预后的血清tnf-a、mmp-2、vegf、il-1β含量具有显著差异(p<0.05),但与低剂量组相比无显著性差异(p>0.05);蠲痛饮中、高剂量组及西药组与蠲痛饮低剂量组相比,效果有显著差异(p<0.05),但中、高剂量组及西药组之间效果无明显差异(p>0.05)。4各组大鼠内膜组织pi3k、akt、mtor蛋白含量的表达与正常组对比,模型组及低剂量组中pi3k、akt、mtor蛋白含量明显升高,与其有显著性差异,具有统计学意义(p<0.05),而与中、高剂量、西药组相比,无明显差异(p>0.05);与模型组对比,中、高剂量、西药组干预后的表达具有显著差异(p<0.05),但低剂量组与模型组无显著性差异(p>0.05);蠲痛饮中、高剂量组及西药组与蠲痛饮低剂量组相比,效果有显著差异(p<0.05),但中、高剂量组及西药组之间效果无明显差异(p>0.05)。5各组大鼠内膜组织p70s6kmrna结果分析采用real-timepcr技术检测正常组大鼠子宫内膜及模型大鼠异位内膜组织的p70s6kmrna的表达。p70s6kmrna含量的表达通过计算标本的p70s6kmrna与β-actinmrna的对比进行测定。结果显示:与正常组对比,p70s6kmrna在各组模型大鼠的相对表达都明显升高,尤其与模型组及低剂量组相比,有显著性差异,具有统计学意义(p<0.05),与、高剂量、西药组干预后效果无明显差异(p>0.05);与模型组对比,中、高剂量、西药组干预后的表达具有显著差异(p<0.05),但低剂量组与模型组无显著性差异(p>0.05);蠲痛饮中、高剂量组及西药组与蠲痛饮低剂量组相比,效果有显著差异(p<0.05),但中、高剂量组及西药组之间效果无明显差异(p>0.05)。结论:1蠲痛饮具有良好的活血祛瘀止痛,温肾健脾利湿之功,对子宫内膜异位症有着确切的疗效;2蠲痛饮可以降低模型大鼠血清中TNF-a、MMP-2、VEGF和IL-1β的含量;3蠲痛饮可以降低模型大鼠异位内膜组织中PI3K、AKT、mTOR的蛋白含量的表达及p70s6k mRNA的水平;4蠲痛饮可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活来发挥对子宫内膜异位症模型大鼠的治疗作用。