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目的1.研究姜黄素对人肝癌细胞HCC-LM3抑制增殖和诱导凋亡的作用。2.探讨姜黄素诱导人肝癌细胞HCC-LM3凋亡的分子机制。方法1.采用不同浓度的姜黄素作用于人肝癌细胞HCC-LM3,CCK-8法检测姜黄素对人肝癌细胞HCC-LM3的生长抑制作用,初步观察姜黄素对人肝癌细胞HCC-LM3增殖的影响。进一步选择其中生长抑制率差异较明显的10、20、40μmol/L的浓度组为实验组,并以0μmol/L浓度组为对照组,采用细胞克隆形成实验检来测细胞的克隆形成能力,采用流式细胞术来检测细胞的凋亡。2.选取浓度分别为10、20和40μmol/L的姜黄素作用于人肝癌细胞HCC-LM3,并以0μmol/L浓度组为对照组。Western blot检测Mcl-1,Bax、Bcl-2和Bcl-xL蛋白的表达,初步探索姜黄素诱导人肝癌细胞HCC-LM3凋亡的分子机制。结果CCK-8检测显示姜黄素浓度为2.5、5、10、15、20、40和60μmol/L对应的生长抑制率分别为(6.71±3.45)%、(12.33±5.02)%、(20.07±5.60)%、(57.80±7.34)%、(78.37±6.53)%、(91.73±6.14)%和(96.18±3.45)%,提示低浓度的姜黄素对人肝癌细胞HCC-LM3生长抑制作用较弱,高浓度的姜黄素素对人肝癌细胞HCC-LM3的生长抑制作用较强,其抑制作用呈浓度依赖性。细胞克隆实验结果提示姜黄素能够抑制人肝癌细胞HCC-LM3的克隆增殖能力,而且姜黄素的浓度越高,其抑制能力越强。当姜黄素浓度>20μmol/L时,人肝癌细胞HCC-LM3的克隆增殖能力受到显著的抑制。选用浓度为0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L的姜黄素作用人肝癌细胞HCC-LM3 48h后,流式细胞仪检测对照组和实验组的细胞凋亡率依次为(5.2±1.44)%、(9.9±3.31)%、(55.67±5.29)%、(79.63±4.71)%,各实验组凋亡率均高于姜黄素浓度为0μmol/L的对照组(P<0.05),提示姜黄素可诱导人肝癌细胞HCC-LM3凋亡,并呈浓度依赖性。2.人肝癌细胞HCC-LM3经浓度为0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L的姜黄素处理48h后,Western blot检测Mcl-1,Bax、Bcl-2和Bcl-xL蛋白的表表达。检测发现实验组细胞中的Mcl-1蛋白表达明显低于姜黄素浓度为0μmol/L的对照组,差异有统计学意义(p<0.05)。而且,姜黄素浓度低的实验组细胞中的Mcl-1蛋白表达高于高浓度组,差异统计学意义(p<0.05)。姜黄素能够抑制人肝癌细胞HCC-LM3中Mcl-1蛋白的表达,并且抑制作用呈剂量依赖性。检测还发现各实验组细胞中的Bax蛋白表达高于对照组,而且姜黄素浓度越高,Bax蛋白表达越高,差异均有统计学意义(p<0.05)。姜黄素可以上调Bax蛋白的表达,并且呈浓度依赖性。检测同时也发现,无论姜黄素浓度如何变化,实验组和对照间以及不同的实验组间Bcl-2和Bcl-xL蛋白的表达均未见明显改变,差异无统计学意义(p>0.05)。姜黄素对人肝癌细胞HCC-LM3中的Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达无影响。结论:1.姜黄素可以抑制人肝癌细胞HCC-LM3的增殖并诱导人肝癌细胞HCC-LM3凋亡。2.姜黄素可能通过上调促凋亡蛋白Bax的表达和下调抗凋亡蛋白Mcl-1的表达来发挥诱导人肝癌细胞HCC-LM3凋亡的作用。