AAV2rep78对HepG2细胞凋亡及信号转导途径的影响

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目的研究AAV2 rep78基因及其蛋白质产物对人肝癌细胞HepG2的凋亡及其途径的影响。方法用脂质体转染法将AAV2 rep基因真核表达载体pCI/neo-Rep78瞬时转入HepG2细胞,以未转染的HepG2细胞及转染空载体pCI/neo的HepG2细胞为对照;分别抽提三组细胞总RNA,RT-PCR检测AAV2 rep78基因在各组的表达;MTT法检测三组细胞的增殖活性,TUNEL法检测各组细胞凋亡情况;以β-actin为内参,半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因Fas、FasL、Bax、Bcl-xL、c-myc表达量的变化。结果AAV2 rep78转染HepG2细胞后,RT-PCR扩增出AAV2 rep78基因片段,空载体组及正常对照组均未扩增出相应片段。HepG2细胞转染AAV2 rep78基因后,与对照组细胞相比增殖能力明显下降,凋亡增多,差别有统计学意义(P<0.01);转染AAV2 rep78基因的HepG2细胞Fas、FasL、Bax、Bcl-xL、c-myc mRNA相对表达量均较转染空载体组和未转染质粒组明显增高,差别有统计学意义(P<0.01)。结论成功将AAV2 rep78基因转染入HepG2细胞,并在细胞中表达。转染AAV2 rep78基因可同时上调Fas、FasL、Bax、Bcl-xL、c-myc表达,促进HepG2细胞的凋亡,并抑制细胞增殖。
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