带毒与不带毒灰飞虱唾液腺差异表达蛋白对介体取食行为和传毒率的影响

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灰飞虱是Laodelphax striatellus是亚洲稻区水稻上的重要害虫,可传播水稻条纹叶枯病毒(Rice stripe virus,RSV)造成水稻条纹叶枯病的流行。RSV隶属于纤细病毒属,主要由灰飞虱以持久、循回增殖型方式传播。唾液腺是RSV传播需要克服的屏障之一,而RSV克服唾液腺屏障的机制尚缺乏研究。前期的研究发现,带毒灰飞虱唾液腺中α-亚基-ATP合酶(ATP synthase subunit alpha)、线粒体内膜移位酶(Mitochondrial import inner membrane translocase)、苹果酸脱氢酶(NADP-dependent malic enzyme)、微管蛋白-a-2(Tubulin alpha-2)、泛素-60s核糖体L前体(UJbiquitin-60S ribosomal protein L40 precursor)以及电压依赖型阴离子通道蛋白(Voltage-dependent anion-selective channel, VDAC)等6个蛋白的表达水平显著高于无毒灰飞虱唾液腺;带毒灰飞虱唾液腺中前5个蛋白基因的表达水平亦显著高于不带毒灰飞虱。本论文研究了电压依赖型阴离子通道蛋白的氨基酸全长序列及基因表达,并用RNA干扰研究了上述6个唾液腺差异蛋白基因对介体取食行为和传毒率的影响。主要结果如下:(1)利用RACE技术,从携带RSV的灰飞虱体内成功扩增出全长为1464bp的电压依赖型阴离子通道蛋白核苷酸序列。将全长核苷酸序列提交到NCBI的GenBank数据库中,命名为LsVDAC。采用实时定量PCR的方法对LsVDAC基因表达进行相对定量,结果发现带毒灰飞虱唾液腺和全身中LsVDAC基因的表达均显著上调。与不带毒灰飞相比,带毒灰飞虱唾液腺中LsVDAC基因的相对表达量提高了49.2%;灰飞虱虫体中LsVDAC基因的相对表达量提高了6.1%。(2)采用RNAi法研究了α-亚基-ATP合酶基因(LsATP)、线粒体内膜移位酶基因(LsMIT)、苹果酸脱氢酶基因(LsNADP)、微管蛋白-a-2基因(LsTUB)、泛素-60s核糖体L40前体基因(LsUBI)以及电压依赖型阴离子通道蛋白基因(LsVDAC)等6个基因对灰飞虱取食行为和传毒率的影响。结果显示:LsATP干扰后,灰飞虱在取食过程中口针在木质部取食的持续时间((0.23±0.19)min)显著低于对照组((174±0.71)min);LsMIT干扰后,灰飞虱口针在韧皮部细胞外移动的时间较对照提高54.9%;LsNADP干扰后,灰飞虱在木质部持续取食时间(0.04±0.03min)显著低于对照组((1.74±0.71)min);干扰LsTUB和LsUBI对灰飞虱的行为参数无明显影响;LsVDAC干扰后,灰飞虱口针在韧皮部细胞外移动的时间较对照增加48.3%;在木质部取食的持续时间((0.17±0.10) min)显著短于对照((1.74±0.71)min)。取食dsATP、dsTUB及dsUBI后,处理组灰飞虱的传毒率与相应的对照无显著差异,表明这LsATP、LsTUB及LsUBI这3个基因对灰飞虱的传毒无显著影响。取食dsMIT、dsNADP、dsVDAC后,灰飞虱的传毒率分别较对照下降了74.9%、87.6%、74.9%,表明LsMIT.LsNADP及LsVDAC这3个基因在灰飞虱的传毒中具重要作用。通过分析,认为LsMIT.LsNADP及LsVDAC干扰所致灰飞虱传毒率的下降与取食行为变化无关,可能与能量代谢以及与蛋白的互作改变有关。
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