大黄鱼内脏白点病病原菌的快速鉴定及其抗感染中药预防免疫

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目的用多重PCR法鉴别香鱼假单胞菌;探索香鱼假单胞菌表面抗原的免疫活性;筛选出对香鱼假单胞菌具有抑菌作用的中草药;以合适的途径对大黄鱼进行给药,检测大黄鱼免疫学因子和抗病能力的变化情况,建立中草药对大黄鱼香鱼假单胞菌病的防治技术。方法①设计并合成3对特异性引物,进行多重PCR。②制备香鱼假单胞菌的主要表面抗原包括脂多糖、外膜蛋白、生物膜多糖和灭活全菌疫苗,注射免疫大黄鱼;免疫28天后,检测试验鱼血清抗体效价、白细胞吞噬活性和溶菌酶活性,免疫28天和35天后通过人工攻击试验检测免疫保护率。③通过纸片琼脂扩散法进行体外抑菌实验,筛选出对香鱼假单胞菌具有抑菌作用的中草药。④制备中草药药物饵料,投喂大黄鱼进行非特异免疫;检测超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等的活性;检测中草药体内抑菌作用。结果①多重PCR反应后,香鱼假单胞菌致病菌株出现3条目的基因片段。②所有免疫组都激发了显著的体液和非特异性免疫应答,但在人工攻击后均未起到有效的免疫保护作用。③筛选出了五倍子、黄芩、党参等对香鱼假单胞菌具有明显抑菌作用的6种中草药。④喂养不同中草药28天后,黄芩组、黄芪组和党参组表现了一定水平的保护力。说明中草药对香鱼假单胞菌具有一定的免疫作用。结论①实验所建立的多重PCR具有可行性,可应用于香鱼假单胞菌的快速鉴定。②免疫组具有一定的免疫反应,证实了采用疫苗法来预防鱼类香鱼假单胞菌病的可行性。③提示了中草药添加剂能够有效提高大黄鱼非特异性免疫功能,为中草药在大黄鱼养殖中的应用提供了一定理论基础。
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