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秀珍菇味道鲜美、肉质脆嫩,含有丰富的蛋白质、维生素、糖类、不饱和脂肪酸、叶酸及微量元素等,营养价值很高,且具有抗肿瘤、抗氧化性、降低胆固醇、降血脂等多种功效。秀珍菇菌丝有很强的腐生能力,对环境适应性强,生物转化率高。巨大口蘑营养丰富、味道鲜美、抗褐变、耐贮藏,是一种高温型食用菌,能够在2235℃条件下出菇,又因其栽培原料来源广泛,栽培技术简单粗放,生物转化率高,营养价值高,近年来在市场上有非常好的发展前景,但其生长缓慢、栽培周期长、需要覆土才能出菇,制约了其工厂化栽培的发展。为了获得兼具秀珍菇和巨大口蘑优良特性的新菌株,本研究选择以秀珍菇和巨大口蘑为亲本菌株,进行原生质体融合育种。系统地对秀珍菇、巨大口蘑两者原生质体的制备与再生、融合条件优化、融合子鉴定、融合菌株生物学特性等进行了研究,旨在选育兼具巨大口蘑独特风味口感、耐贮藏时间长、不易褐变、菌丝生长速度快且不需要覆土出菇、营养丰富的中高温型新菌株,对融合菌株从形态学、拮抗实验、酶活测定、分子等方面进行了鉴定,并对融合菌株的生物学特性和栽培技术进行了初步研究,为今后食用菌遗传育种及品种改良提供一定的方法和借鉴作用。主要研究结果如下:1、亲本菌株的筛选:本课题中以菌丝生长速度、原生质体产量作为衡量指标,最终筛选确定秀珍菇X01和巨大口蘑J01作为原生质体融合的亲本菌株。2、原生质体制备条件优化:巨大口蘑J01菌株的原生质体制备优化工艺条件为:菌龄5 d,纤维素酶的浓度为2.99%,溶壁酶的浓度为0.0073%,蜗牛酶的浓度为3.00%,酶解时间为200 min,酶解温度为31.95℃。秀珍菇X01菌株的原生质体制备优化工艺条件为:菌龄5 d,纤维素酶浓度0.17%,溶壁酶浓度0.25%,蜗牛酶浓度0.0080%,酶解时间80 min,酶解温度32℃。3、秀珍菇与巨大口蘑原生质体融合工艺设计与优化:应用均匀设计法对秀珍菇和巨大口蘑原生质体融合工艺进行优化,结果表明:原生质体热灭活条件为50℃下水浴25 min;PEG的浓度为25.00%,融合时间14 min,融合温度为34℃,Tris添加量为0.014 mol/L,CaCl2添加量为0.025 mol/L,p H值为7.40时,秀珍菇与巨大口蘑原生质体的融合率达到最大。4、融合菌株的筛选:应用形态学和分子生物学方法对得到的融合菌株进行了选择和鉴定。通过形态学特征的观察比较,在本研究中一共筛选获得融合菌株2株,分别为R7-1和R7-2,其菌丝生长速度快,并可以与亲本形成较为明显的拮抗线;采用ISSR技术对R7-1和R7-2两株融合菌株进行鉴定,初步说明R7-1和R7-2均为新菌株。5、对融合菌株R7-1和R7-2的母种培养基进行优化:融合子R7-1的最优化母种培养基为葡萄糖1.0%、蛋白胨1.0%、酵母膏0.1%、VB12.00 mg/L、轻质碳酸钙0.10%、硫酸镁0.30%、磷酸二氢钾0.10%,pH 9.35。融合菌株R7-2的最优化母种培养基为葡萄糖2.80%、蛋白胨1.00%、酵母膏0.1%、VB1 5.05 mg/L、轻质碳酸钙0.10%、硫酸镁0.26%、磷酸二氢钾0.10%,pH 7.09。6、对融合菌株R7-1和R7-2的原种培养基进行筛选:融合菌株R7-1和R7-2在小麦粒培养基中的菌丝生长速度最快,萌发时间最短,菌丝生长到长满瓶子所用时间最短,与其他种类原种培养基（玉米种、混合料）差异显著。其次是玉米粒培养基,融合菌株在玉米粒培养基中菌丝生长浓密、洁白。融合菌株在混合料培养基菌丝生长最慢。7、对融合菌株R7-1和R7-2的栽培种培养基进行了优化。融合菌株R7-1的最优化栽培种培养基为:木屑18.17%、棉籽壳15.42%、玉米芯28.67%、稻草粉13.86%、甘蔗渣4.67%、磷酸二氢钾0.04%、麸皮17.97%、石灰1.20%。融合菌株R7-2的最优化栽培种培养基为:木屑8.84%、棉籽壳19.59%、玉米芯33.14%、稻草粉5.72%、甘蔗渣11.45%、磷酸二氢钾0.04%、麸皮19.89%、石灰1.33%。