【摘 要】
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目的探讨葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidins, GSP)对骨髓间充质干细胞(bone marrow messenchymal stem cells, BMSCs)诱导分化后神经元样细胞是否具有抗凋亡作用
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目的探讨葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidins, GSP)对骨髓间充质干细胞(bone marrow messenchymal stem cells, BMSCs)诱导分化后神经元样细胞是否具有抗凋亡作用及作用的最适剂量。方法BMSCs由成年健康雄性WISTAR大鼠股骨全骨髓法取得,经贴壁培养法分离纯化,取第五代BMSCs用低中高剂量(20mg/L、40mg/L、80mg/L)GSP干预24 h,设立空白对照组。以含有20%胎牛血清的1mmol/L B-巯基乙醇(BME)预诱导24 h后,继而用含有40ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的无血清培养基作为诱导液诱导24 h。采用免疫细胞化学法鉴定神经细胞特异性抗原标记神经元特异性烯醇化酶(neuronspecificenolase, NSE)和微管相关蛋白-2 (microtubule-associated protein 2, MAP-2)的表达。MTT法检测不同剂量的GSP干预24 h后对神经元样细胞活力的影响,流式细胞仪检测以Fluo-3 AM为荧光探针标记的细胞内游离钙浓度,以Annexin V凋亡试剂盒检测组间细胞凋亡率。结果成功分离培养WISTAR大鼠BMSCs,经诱导分化后大部BMSCs变成神经元样细胞并表达NSE和MAP-2。GSP干预组细胞生长状态,活力及存活细胞比例较好。结论GSP能使BMSCs诱导分化后神经元样细胞保持较好的活力,对抗自由基产生,减少细胞凋亡。
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