利用纤维床生物反应器发酵廉价生物质生产丙酸的研究

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丙酸是一种广泛应用于食品、化学和医药等行业的短链脂肪酸,目前主要通过石油化工的方法来生产。由于化石资源的不可再生及人们对可持续发展理念的认可,微生物发酵法生产丙酸这一可持续生产途径,受到越来越多的关注。本课题采用纤维床生物反应器固定化产酸丙酸杆菌发酵菊芋、木薯淀粉水解液等廉价生物质,发展发酵法生产丙酸的新工艺。在摇瓶水平对产酸丙酸杆菌基本生长特性进行研究。结果表明,该菌在32℃,初始pH6.5,摇床转速150r/min,接种培养24h的种子液,接种量为5%条件下,产酸丙酸杆菌生长及产酸水平达最高值;该菌可利用碳源谱十分广泛,但对氮源要求比较高,只可利用有机氮源;在不同初始葡萄糖浓度下,产酸丙酸杆菌生长及产酸水平差异不大,无明显底物抑制现象;在2g/L的初始丙酸盐浓度下,该菌生长受到抑制。在121℃,稀硫酸浓度为0.01mol/L,固液比1:10条件下,水解40min,对菊芋粉进行水解预处理,其还原糖得率为58.7%。以菊芋水解液作为丙酸发酵的廉价碳源,比较纤维床固定化补料流加和游离补料流加丙酸发酵动力学,在固定化细胞发酵工艺下,发酵结束时获得更高的丙酸浓度(68.5g/L vs.40.6g/L),更高的丙酸得率(0.434g/g vs.0.379g/g)及更高的丙酸产率(1.55g/L/h vs.0.190g/L/h)。在反复分批发酵模式下,八个批次,200多个小时的发酵过程中,以菊芋水解液为底物,丙酸平均得率为0.483g/g,丙酸平均产率为3.69g/L/h,证明FBB系统具有较高的操作稳定性。在纤维床固定化丙酸发酵系统中,研究初始葡萄糖浓度和泵流速对丙酸发酵的影响。实验发现没有明显的底物抑制现象,初始葡萄糖浓度对丙酸发酵的影响不大。当泵流速为80ml/min时,丙酸得率和产率分别为0.511g/g和4.31g/L/h。以木薯淀粉水解液为碳源,采用固定化补料流加工艺,发酵结束时丙酸浓度达50.1g/L,丙酸得率为0.433g/g(以木薯淀粉质量计)。采用两个纤维床反应器串联进行发酵,在单批丙酸发酵生产中,丙酸终浓度为41.5g/L,丙酸得率为0.466g/(g以木薯淀粉质量计),丙酸产率为2.68g/L/h。最后,对产酸丙酸杆菌进行适应性驯化,以提高其对丙酸的耐受力。采用游离细胞反复补料流加模式发酵葡萄糖,最终丙酸产量达60.46g/L。采用FBB固定化反复补料流加模式发酵葡萄糖,最终丙酸产量达80.86g/L,再分别以游离驯化菌和固定化驯化菌为种子液,研究驯化菌发酵动力学,发现驯化菌比野生菌对终产物丙酸具有更高浓度的耐受力。
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