叶下珠多糖的提取分离及分子结构与生物活性初步研究

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目的:从叶下珠全草中提取出多糖,通过纯化多糖并进行结构分析和生物活性的研究,以期为叶下珠药材临床应用的药效物质基础及作用机制研究提供参考。方法:(1)采用经典的水提醇沉法提取分离得到叶下珠多糖(PULP);然后通过DEAE-52离子交换柱进一步分级得到叶下珠多糖单一组分,并用sephadexG-200凝胶柱和HPLC法检测其纯度。(2)利用还原力反应体系,H2O2/Fe2+体系和卵黄蛋白(LPO)反应体系三方面来评价叶下珠多糖组分的体外抗氧化活性。(3)采用IR、GC、HPLC等现代色谱、光谱技术,结合理化性质、酸水解和部分酸水解,高碘酸氧化等传统化学方法进行叶下珠多糖组分的结构分析。结果:(1)叶下珠全草经水提醇沉,Sevag法除蛋白后得到粗多糖。利用苯酚硫酸法测定其糖含量为28.27%。(2)经过DEAE-52离子交换柱进一步分离得到四个单一组分,分别记为PULP Ⅰ、PULP Ⅱ、PULPⅢ和PULPⅣ。收集较大的两个组分PULP Ⅱ和PULPⅢ,经sephadexG-200凝胶柱和HPLC法检验其组分相对单一。(3)体外抗氧化实验表明:PULP Ⅱ和PULP Ⅲ具有良好的的抗氧化活性。并且随着多糖浓度的增加,其还原能力、清除体外羟基自由基能力和抗脂质过氧化能力也增强。(4)部分理化性质分析表明:PULP Ⅱ和PULPⅢ中的糖醛酸含量分别为8.37%和145.1%; PULP Ⅱ和PULPⅢ均不含有N、S元素,为非氨基糖;经HPLC法分析测定PULP Ⅱ和PULPⅢ的平均相对分子质量分别为579962.6和418793.5。(5)结构初步分析表明:PULP Ⅱ单糖组成及其比例为Rha:Ara:Man:Glc为0.11:0.36:0.08:0.45; PULPⅢ单糖组成及其比例为Rha:Ara:Man:Glc为0.27:0.28:0.1:035. PULP Ⅱ主链主要由Rha、Ara和Glc组成;PULPⅢ主链主要由Rha、Ara、Man和Glc组成。PULPⅡ和PULPⅢ糖苷键的连接方式一样,以1→6连接为主,同时还存在1→4和1→3连接方式。
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