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目的:肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤,2002年全世界肺癌新发病例约135万,死亡病例约118万,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)约占肺癌病人总数的80%。随着工业化进展,肺癌的发病率逐年增高,大多数肺癌患者就诊时已是中晚期,失去手术机会,半数以上肺癌患者在治疗过程中需接受放化综合治疗。尽管临床上规范化治疗的实施,但5年生存率仍仅为15%左右。因此,如何提高肺癌对放化疗的敏感性,减少局部复发和远处转移、改善患者生存期是目前临床急需解决的问题。随着分子生物学的发展,人类逐渐认识到肺癌的发生、发展是一个多基因调控的多阶段发生过程。研究表明,肿瘤乏氧细胞的产生和存在使肿瘤对放化疗的抗拒性增加,肿瘤更具有侵袭性,更易发生转移。热休克蛋白90(heat shock protein 90, HSP90)和缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)均在人体多种肿瘤中高表达。HSP90、HIF-1α等乏氧应答基因使肿瘤得以存活、增殖、转移,与肿瘤免疫、多药耐药及癌症患者的预后关系密切,对常规治疗包括放疗和化疗药物产生抗拒。本实验为研究HSP90α在非小细胞肺癌组织的表达及其与预后的关系,进一步探讨HSP90α和HIF-1α的关系,采用免疫组织化学(immunohi-stochemistry,IHC)S-P法检测了50例接受单纯放化综合治疗的NSCLC患者的癌组织蜡块中的HSP90α和HIF-1α蛋白表达,探讨二者的相互关系及其与肺癌临床病理特征的关系,进而观察HSP90α与NSCLC预后的关系,为NSCLC基因治疗新策略、新靶点的探索提供理论和实验依据,为非小细胞肺癌的临床治疗(尤其是个体化治疗)提供更充分的理论依据及新的策略和途径。方法:1本研究所用标本取自2007年11月至2010年10月在河北省人民医院肿瘤科收治的有明确组织学病理诊断、非手术治疗的非小细胞肺癌患者50例,该组病例均经纤维支气管镜检查或经皮肺穿刺取病理证实。TNM临床分期采用AJCC/UICC分期标准,其中I期0例,II期10例,III期20例,IV期20例。将患者分为早期组(I-II期,10例)和中晚期组(III-IV期,40例)。2应用免疫组织化学方法(SP法),检测50例肺癌组织蜡块中HSP90α和HIF-1α蛋白的表达情况与肺癌患者临床病理因素的关系,分析二者相互关系及其与NSCLC预后的关系。3运用SPSS13.0统计软件包进行分析处理。计数资料采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义;应用Kaplan-Meier进行生存分析,Log-rank进行生存率的比较,以α=0.05为检验水准;采用Cox比例风险回归模型进行多因素分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1 HSP90α在非小细胞肺癌组织中的表达情况HSP90α在非小细胞肺癌组织中阳性表达主要见于癌细胞的细胞浆,少数定位于胞核,呈棕黄色颗粒状,弥漫状分布,总阳性表达率为78%(39/50)。相关性检验发现,HSP90α的阳性表达与临床TNM分期、淋巴结转移呈正相关,χ2检验显示有统计学差异(P<0.05)。HSP90α在中晚期(III-IV)NSCLC组织中阳性表达率为87.5%(35/40),明显高于在早期(I-II)NSCLC组织中的表达40%(4/10);HSP90α在有淋巴结转移组中阳性表达为87.8%(36/41),在无淋巴结转移组中表达率为33.3%(3/9)。HSP90α蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、肿瘤病理类型及分化程度差异无统计学意义(P>0.05)。2 HIF-lα在非小细胞肺癌组织中的表达情况HIF-lα在非小细胞肺癌组织中阳性表达主要见于癌细胞的胞细核,呈棕黄色,弥散或灶状分布,总阳性表达率为62%(31/50)。相关性检验发现,HIF-lα的阳性表达与临床TNM分期、淋巴结转移呈正相关,χ2检验显示有统计学差异(P<0.05),HIF-lα在III-IV期NSCLC组织中阳性表达率为72.5%(29/40),明显高于I-II期肺癌组20%(2/10);HIF-lα在有淋巴结转移中表达率为70.7%(29/41),在无淋巴结转移NSCLC中阳性表达率为22.2%(2/9)。HIF-lα蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、肿瘤病理类型及分化程度均无显著性差异(P>0.05)。3 HSP90α和HIF-1α在NSCLC组织中表达的相关性HSP90α和HIF-1α蛋白在NSCLC组织中的均表达例数为30例,关联性检验显示,二者蛋白表达呈正相关关系(Pearson列联系数C=0.501,P= 0.000)。30例患者中28例为中晚期,其中III期11例,IV期17例。4 NSCLC放化疗后生存率分析50例NSCLC患者治疗后1、2、3年生存率分别为42.9%、18.8%、8%,中位生存期为11.0个月,平均生存期15.4个月;HSP90α蛋白表达阳性组和阴性组放化疗后1、2、3年生存率分别为71.8%、34.2%、3.1%和76.2%、45.7%、30.5%,Log-Rank检验显示两组生存曲线差异有显著性差异(P=0.009);HIF-1α蛋白表达阳性组和阴性组放化疗后1、2、3年生存率分别为64.2%、7.7%、3.9%、和64.7%、40.4%、16.2%,Log-Rank检验显示两组生存曲线差异有显著性差异(P=0.015)。5 NSCLC预后相关因素分析单因素分析显示:淋巴结转移、临床分期、HSP90α和HIF-1α与非小细胞肺癌放化疗后预后均有关(P<0.05);患者性别、年龄、肿瘤生长部位、病理类型及肿瘤组织分化程度对非小细胞肺癌预后未见明显影响(P>0.05)。Cox回归模型多因素分析显示TNM临床分期(B=1.925,P=0.002)和HIF-1α(B=0.834,P=0.030)为NSCLC独立预后危险因素。结论:1 NSCLC组织中HSP90α和HIF-1α蛋白均有高表达;HSP90α、HIF-1α蛋白的表达均与NSCLC的TNM分期、淋巴结转移密切相关,提示临床分期越晚,二者阳性表达越高。2 HSP90α和HIF-1α表达存在正相关性。3 HSP90α和HIF-1α蛋白表达阳性组生存率明显低于阴性表达组。4淋巴结转移、临床分期、HSP90α和HIF-1α蛋白表达与NSCLC预后均有关;临床TNM分期及HIF-1α是NSCLC预后独立危险因素。