【摘 要】
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生物素又名维生素H是许多羧化酶的一个重要的辅酶因子,如乙酰辅酶A羧化酶和丙酮酸羧化酶等。bioC基因编码的丙二酰载体蛋白氧甲基转移酶能够参与合成庚二酰辅酶A,而庚二酰辅酶A在7-酮基-8-氨基壬酸合成酶(KAPA合成酶)的催化下开始进入生物素的生物合成途径。为了探究生物素是否参与黄曲霉的生长发育以及次级代谢,本文对黄曲霉中生物素生物合成相关基因bioC功能进行初步的功能研究。bioC基因编码一个丙
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生物素又名维生素H是许多羧化酶的一个重要的辅酶因子,如乙酰辅酶A羧化酶和丙酮酸羧化酶等。bioC基因编码的丙二酰载体蛋白氧甲基转移酶能够参与合成庚二酰辅酶A,而庚二酰辅酶A在7-酮基-8-氨基壬酸合成酶(KAPA合成酶)的催化下开始进入生物素的生物合成途径。为了探究生物素是否参与黄曲霉的生长发育以及次级代谢,本文对黄曲霉中生物素生物合成相关基因bioC功能进行初步的功能研究。bioC基因编码一个丙二酰氧甲基转移酶,参与合成庚二酰辅酶A,后者是作为生物素合成的一个前体。本研究预测并鉴定了黄曲霉菌中BioC,然后以乳清酸核苷-5’-磷酸脱羧酶基因(pyrG)为选择标记基因并完全替代bioC基因,构建了黄曲霉bioC基因敲除菌株(ΔbioC);此外,通过大肠杆菌和曲霉共染色体整合穿梭载体pPTR I(E.coli-Aspergillus chromosomal integrating shuttle vector pPTRI)构建了敲除体互补菌株(CΔbioC)。经过一系列表型实验结果表明,与野生型和互补菌株相比敲除bioC基因导致黄曲霉生长速率显著下降,且产孢量减少,菌核数也减少。通过薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)分析黄曲霉毒素B1合成水平,结果显示ΔbioC敲除突变体黄曲霉毒素的合成量减少,多种胁迫实验结果表明ΔbiooC突变体在胁迫环境下的生长速率显著降低。此外,花生和玉米的侵染实验也证实了ΔbioC突变体的侵染能力明显下降。另外,在培养基中额外添加外源生物素,发现bioC敲除突变体的生长速率基本得到恢复,这进一步表明了bioC基因可能是一个生物素生物合成相关的基因。总之,研究证明bioC基因在黄曲霉生长发育、致病性以及黄曲霉毒素合成等过程发挥着的重要作用,有助于我们进一步为深入探讨bioC基因的在机体中的生理生化功能,为bioC基因编码产物的鉴定提供方向。
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