[目的]探讨发夹状RNA(shRNA)通过转染ATO耐药的白血病细胞株K562/AS2对MRP1基因表达的抑制作用。[方法]本实验设计包括两个部分:第一部分,设计并合成3条针对MRP1基因的shRNA序列,在脂质体的介导下转染K562/AS2细胞,用荧光实时定量PCR分析MRP1 mRNA的表达水平,流式细胞仪检测MRP1蛋白表达和细胞内柔红霉素累积量;第二部分,根据第一部分实验结果,筛选出来其中一条对MRP1基因抑制效果最佳的shRNA序列,将其构建到质粒表达载体中,经酶切鉴定分析和测序,分析MRP1干扰质粒是否构建成功。[结果]第一部分:用带荧光标记的非特异性shRNA转染细胞后,流式细胞仪检测得转染效率为(76.17±1.57)% ;经MRP1-shRNA作用24h后,K562/AS2细胞株中MRP1 mRNA和蛋白表达水平分别最大下调幅度为(79.1±0.07)%和(62.48±0.86 ) % ( P< 0.05),同时细胞内柔红霉素累积量显著增加(P< 0.05),其中MRP1-shRNA b干扰序列对MRP1基因表达抑制效果最为明显。第二部分:将MRP1-shRNA b干扰序列构建到质粒pGenesil-1.1上,经酶切鉴定及测序分析,质粒pGenesil-1.1-MRP1-shRNA b符合设计要求,MRP1基因干扰质粒构建成功。此质粒同时具有G418抗性基因和卡那霉素抗性基因以及EGFP报告基因。[结论]:MRP1 shRNA可明显抑制ATO耐药的白血病细胞株K562/AS2细胞MRP1基因的表达,使MRP1mRNA和蛋白表达量下降,其中MRP1-shRNA b干扰序列对MRP1基因表达抑制效果最为明显。MRP1基因干扰质粒pGenesil-1.1-MRP1-shRNA b构建成功,此质粒同时具有G418抗性基因和卡那霉素抗性基因以及EGFP报告基因。