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RNA沉默是在真核生物中发现的一种序列特异的转录后基因失活机制，有研究表明，高温增强病毒及转基因诱导的RNA沉默，水杨酸也与RNA沉默介导的病毒抗性有关。但具体的影响机制还不清楚。本研究利用烟草材料，探讨了瞬时侵染介导的RNA沉默、病毒介导的RNA沉默受温度和水杨酸的影响及其相互关系，具体研究结果如下：（1）农杆菌瞬时侵染试验表明，高温及水杨酸均能促进瞬时侵染介导的RNA沉默。当培养温度为30℃时，野生型三生烟侵染后第5天，侵染区GFP完全沉默，而24℃培养条件下，侵染后第5天，侵染区仍有GFP荧光。NahG转基因植株30℃，侵染后5天仍有微弱GFP荧光，24℃检测到的GFP荧光也强于野生型植株。NahG为水杨酸（SA）羟化酶基因，SA羟化酶催化SA成儿茶酚，使NahG转基因植株体内SA水平大大低于野生型植株，因此推测NahG转基因植株RNA沉默程度降低很可能与SA减少有关，而体外喷施SA的实验也证明水杨酸的确能促进瞬时侵染介导的RNA沉默。为了研究高温、水杨酸对RNA沉默的影响机制，我们通过荧光定量PCR检测了5种SA诱导的抗病相关基因AOX1、RDR1、PR1a、PR2和PR1b表达水平，结果表明，在RNA沉默程度最高的30℃处理野生型三生烟中，这5种基因的表达量明显高于24℃处理野生型和30℃处理NahG转基因等低沉默程度的植株。这说明高温对5种抗病基因的诱导是通过影响SA实现的，RNA沉默与水杨酸介导的SAR防御反应均受高温激发，两种防御途径可能存在交叉互作，有研究表明，高温处理会使植物叶片中自由态SA含量迅速升高，因此推测高温可能通过提高SA水平进而促进RNA沉默。（2）PVX病毒接种试验表明，高温及水杨酸均能促进病毒诱导的RNA沉默。PVX接种烟草叶片14天后观察，24℃处理植株出现明显症状，30℃处理植株不发病，而24℃、30℃处理NahG转基因植株均表现为整株系统感病，而且24℃处理下的NahG转基因接种植株发病程度及病毒含量均高于野生型植株。这说明高温能促进抗病毒RNA沉默，而通过转NahG基因降低了植株内SA水平时，高温便不能有效激活抗病毒RNA沉默。综上所述，SA可能在诱导RNA沉默中起关键作用，且位于高温响应的下游，一旦SA合成途径受干扰或被阻断，高温促进RNA沉默的作用便会受影响。为了进一步探讨温度、水杨酸对病毒诱导的RNA沉默的影响机制，我们通过荧光定量PCR检测了5种SA诱导的抗病相关基因AOX1、RDR1、PR1a、PR2和PR1b，结果表明，AOX1、PR1a、PR2和PR1b在发病最严重的24℃处理下的NahG转基因接种植株中表达量高于30℃处理下的NahG转基因接种植株，野生型植株中4种基因的表达量24℃处理高于30℃处理，而RDR1的表达量各处理间没有明显差异。这表明AOX1、PR1a、PR2和PR1b可能受PVX病毒直接诱导，而不受RNA沉默程度影响。（3）为了研究沉默增强过程中涉及的植物相关基因，对高温及水杨酸处理的瞬时侵染本生烟材料进行了转录组测序分析，结果表明，高温、水杨酸处理与对照的差异表达基因数分别为601个和14个，其中共有差异表达基因为5个，高温处理与对照相比，有上调基因363个，下调基因238个；水杨酸处理与对照相比，上调基因7个，下调基因7个，涉及基因较少，上下调程度也较低。我们利用qRT-PCR的方法检测了4个高温处理上调基因comp42463_c0，comp40795_c0，comp44509_c0及comp46958_c0，其log2变化倍数分别为3.5851,2.1887,2.4862及2.3758。4个水杨酸处理上调基因comp62975_c0，comp30068_c0，comp61011_c0及comp40205_c0，其log2变化倍数分别为2.8046,1.9292，1.1253及1.0992的表达量，结果与测序结果基本一致，表明转录组测序结果是可靠的。其中comp46958_c0为脯氨酸丰富蛋白，在胁迫条件下，许多植物体内脯氨酸大量积累，它在稳定生物大分子结构、降低细胞酸性、解除氨毒等方面起重要作用。comp62975_c0为推测的非特异性脂质转运蛋白，被认为可能与蜡质合成与运输、抗逆、抗病以及生殖发育等重要生理过程有关。另外，高温处理材料富集了很多与光合途径有关的基因，说明高温可能影响光合途径，而高温增强的RNA沉默与光合途径之间是否存在联系还需进一步研究。