单糖和糖肽的样品前处理及其分析方法研究

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糖类物质是生物体内三种主要的组成成分之一,主要包括单糖、寡糖、多糖以及糖类缀合物(如糖肽、糖脂和糖蛋白等)。糖类物质在生物体各个生物过程中扮演着重要角色,它可以作为能源物质(如葡萄糖、淀粉和糖原)供应生物体各项生命活动。此外,多糖及其与蛋白和脂质的缀合物在免疫和内分泌系统,受精,大脑发育,预防发病机理和血液凝结中起着重要作用。但是,糖类物质所处基体环境比较复杂,因此,建立糖类物质的样品前处理及分析方法具有重要意义。第一章综述了糖类物质特别是单糖和糖肽的样品前处理及检测方法。总结了单糖的净化、液-液萃取、固-液萃取以及分子印迹等样品前处理方法和高效薄层色谱、高效液相、气相以及毛细管电泳检测方式。论述了糖肽的植物凝集素亲和、亲水相互作用、硼酸盐亲和、肼化学和二氧化钛亲和作用等样品前处理方法和质谱检测的发展,并提出了本论文研究思路。第二章建立了基于微波辅助萃取、固相萃取和高效液相色谱联用的技术检测植物中的单糖的方法。优化了微波辅助萃取的溶剂、温度以及萃取时间等条件,并对微波萃取后的植物用荧光共聚焦显微镜观察,结果显示微波对植物细胞的破碎效果显著。对固相萃取条件和色谱分离条件进行了考查。最终,所建立的方法对每个目标物的线性相关系数均大于0.9990,回收率均大于85%。实验结果表明,该方法可以快速、高效地测定植物中的单糖。第三章合成了一种新型的硼酸化碳纳米管用于糖蛋白酶解液中糖肽的富集。单壁碳纳米管经过酸化后与3-氨基苯硼酸反应,将硼酸基共价键合到碳纳米管上。该材料用红外和X射线光电子能谱分析方法表征,结果表明硼酸化修饰成功。将该材料放入超滤管中,通过离心、淋洗和洗脱,成功实现了对辣根过氧化物酶胰酶消解液中糖肽的除盐以及富集。富集后物质经过MALDI-TOF和GlycoMod Tool检测分析出糖肽的可能结果。实验结果表明,该方法能够成功对糖肽同时进行脱盐和富集,有一定的应用价值。
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