微生物提取物诱导马铃薯抗晚疫病及机理的研究

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马铃薯(Solanum tuberosum L.)是世界四大粮食作物之一,我国是世界最大的马铃薯生产基地之一。马铃薯在世界粮食生产中占有非常重要的地位,联合国将2008年命名为“国际马铃薯年”。马铃薯生产的发展一直受到一些真菌病害的严重威胁,尤其是马铃薯晚疫病,造成马铃薯的严重减产甚至绝产。人工免疫诱导植物抗病技术是近十几年来发展起来的技术,具有安全、高效、广谱、持久的特点,可以从根本上改善和提高品种的抗性,从而有可能开辟一条新的植物广谱抗病的方法。尤其是近年来人们已陆续报道了植物提取物、化学物质、物理因子、真菌及细菌提取物对马铃薯晚疫病的诱导抗性。但利用放线菌来源提取物和复配型提取物诱导马铃薯抗晚疫病及机理的报道却不多见。本研究主要对放线菌来源提取物以及将两种微生物源提取物混配后诱导马铃薯块茎抗晚疫病的作用及其机理进行了初步研究。为从丰富的微生物资源尤其是从放线菌中筛选优良的诱导马铃薯抗晚疫病的激发子及利用复配型提高诱抗效果方面的研究打下了基础,并对进一步了解植物诱导产生抗病性机理有一定的参考价值。本实验取得的主要结果如下:1、分别将32种微生物的发酵液(F-0)以及其中真菌和放线菌的胞内提取物(F-1)、胞壁提取物(F-2)单独或复配后作为激发子,诱导处理马铃薯块茎切片,筛选出9种单一型(A5295 F-0、A32912 F-0、A32910b F-0、MK F-0, M102 F-1、Wf3 F-1以及M102F-2、F32 F-2和Wf3 F-2)和5种复配型(A5295 F-0+F32 F-0、A5295 F-0+A32910b F-0、Wf3 F-2+F32 F-2、F32 F-2+ M102 F-2、F32 F-0+A32910b F-0)微生物源激发子,诱抗效果均达到50%以上。其中MK F-0、A5295 F-0和A32910b F-0的诱抗效果分别达到60.42%、63.97%和56.25%。复合型微生物源激发子诱导抗病效果优于其单一型,其中MK F-0+A5295 F-0的诱抗效果最好,达到66.67%,。2、利用硫酸铵沉淀和乙醇沉淀法对诱抗效果显著的两种发酵液型激发子(真菌MKF-0和放线菌A32910bF-0)中的有效诱抗物质进行了初步分析,发现A32910b F-0和MK F-0中的有效诱抗物质相似,均存在于发酵液的硫酸铵沉淀组分(A组分)和硫酸铵沉淀后再经乙醇沉淀所得组分(B组分)中。这些具有诱导马铃薯块茎抗晚疫病的活性物质主要是一些分子量大于8000-10000D物质,推测为蛋白质、多糖、脂质等大分子物质。3、明确了经过诱导处理的马铃薯块茎切片中与抗病性相关的酶(PPO、POD、PAL)活性变化情况,发现诱导处理后马铃薯块茎中POD、PAL、PPO活性均明显高于对照,经A5295发酵液处理后第5d时3种酶活性分别是对照的250.40%、275.14%和27.88%,且在抗性表现出之前就迅速增加达到峰值。4、分析了诱导处理后块茎切片中的可溶性蛋白变化。诱导处理后块茎中可溶性蛋白含量明显增多,比对照增加41.53%,并有一些新蛋白产生。这些新生成的蛋白质分子量均在100KD以下,其中3种分子量在40KD以下,他们可能是PR蛋白,因为新蛋白的产生伴随有抗性相关酶活性的显著增加,所以推测它们具有抗性相关酶活性。可见,利用放线菌来源提取物作为激发子诱导马铃薯抗晚疫病具有非常大的开发潜力。有些微生物提取物复配后诱抗效果获得了明显提高,复配型微生物提取物在诱导马铃薯抗抗晚疫病的应用中也具有广阔的前景。
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