目的:探讨温肾活血方对内膜环境不良致使的反复移植失败(Repeated implantationfailure，RIF)患者种植窗子宫内膜微环境的影响及起效靶点。　　方法:　　实验研究:采用清洁级昆明小鼠，妊娠第1日(PD1)随机分为正常组(N)、模型组(M)、中药低剂量组(L)、中药高剂量组㈣和孕酮组(P)各40只。PD1晨起，H、L组小鼠按0.3 ml/d灌胃高、低剂量中药水煎剂，N、M组小鼠灌胃生理盐水，0.3ml/d，P组小鼠颈后皮下注射黄体酮一橄榄油剂，2 mg/d。PD4天9时，各造模组小鼠颈后皮下注射米非司酮一橄榄油剂0.1ml，形成胚胎着床障碍模型，N组小鼠颈后皮下注射0.1ml橄榄油溶剂。PD2、4、5、8上午9时脱颈椎处死每组各10只小鼠，观察各组平均着床位点数;子宫内膜组织形态;胞饮突的发育状态;子宫内膜组织ER、PR、HOXA10、Wnt4、Wnt5a、Wnt7a、DKK1、β-catenin的表达。　　临床研究:筛选已有冻胚的RIF患者100例，按年龄分层后随机分为中药组和对照组，对照组予以常规FET方案进行内膜准备，中药组在对照组的基础上，予以温肾活血方治疗，用药自月经第三天至移植前日。比较两组临床妊娠率、着床率;子宫内膜厚度、血流、类型及PI、RI;收集移植日子宫内膜组织，采用实时聚合酶链反应检测ER、PR、HOXA10、LIF、ITGβ3在种植窗期的表达，血清E2、P，免疫组化观察ER、PR的阳性面积，HE染色观察子宫内膜组织形态，扫描电镜观察胞饮突。　　结果:　　实验研究:　　(1)平均着床位点数:平均着床位点数M组显著降低(P＜0.01)，H组优于P组，优于L组(P＜0.01），与N组比较无统计学差异（P＞0.05）。　　(2)子宫内膜组织形态:M组子宫内膜发育明显滞后，呈增生期表现，H组较L组腺体增大，分泌旺盛，较P组间质水肿疏松，最接近正常。　　(3)胞饮突:N组胞饮突形态饱满，数量丰富，M组胞饮突发育缓慢，数量少，P组可见退化期胞饮突，L组胞饮突形态不规则，H组胞饮突发育程度接近N组。　　(4) ER、PR:PD2、4天N组与M组比较无统计学差异(P＞0.05），均低于其他组，其中与P、H组差异显著(P＜0.01）。PD5，蛋白表达显示N组ER、PR表达量急剧上升，其他各组受米非司酮影响表达均下降，M组显著低于其他各组(P＜0.05)，免疫组化结果示P和L组PR表达明显低于N组(P＜0.05)，但PR和ER在H和N组间的表达无统计学意义(P＞0.05)。PD8，N组ER、PR水平趋于平缓，随着米非司酮的抑制解除，P、H、L各组表达量接近N组。　　(5) DKK1及β-catenin表达:免疫荧光染色结果显示，PD5天N组的DKK1表达水平最低，M组明显高于其他各组，H组的表达程度低于P及L组，最接近正常水平。PD5天β-catenin的表达，与N组相比各给药组均降低，M组的表达显著低于其他组，H、P组表达较相近，略高于L组。　　(6)子宫内膜HOXA10的表达:PD2、4天各组表达水平尚低，且组间无统计学差异(P＞0.05）。PD5、8天，N组HOXA10表达明显增加，优于其他各组(P＜0.01）;M组低于P、H组(P＜0.01)，与L组比差异无统计学意义(P＞0.05);P、H两组比较无统计学差异(P＞0.05)，至PD8天P组与L组比较也无差异(P＞0.05)。　　(7)子宫内膜Wnt4、Wnt5a、Wnt7a的表达:PD2、PD4各组间比较均无统计学差异（P＞0.05）。PD5，各组指标均低于N组（P＜0.01），M组最少;L组Wnt5a的表达低于P组(P＜0.05);P和H组间比较各指标无差别(P＞0.05)。PD8 M组各指标仍低于N组及其他给药组(P＜0.01);L组各指标表达低于N组(P＜0.05)，Wnt7a的表达低于P组(P＜0.05);P组和H组的Wnt4及Wnt5a与N组比较均无统计学差异(P＞0.05)，Wnt7a均低于N组（P＜0.01），但P组与H组之间比较均无差异(P＞0.05)。　　临床研究:　　(1)基线:组间一般资料平衡、可比。　　(2)临床妊娠率与种植率:中药组较对照组临床妊娠率(40％ VS24％)，种植率(23.2％ VS14.9％)明显增加趋势，但差异无统计学意义(P＞0.05）。中药组35岁以下妊娠率明显高于对照组(P＜0.05)。　　(3)子宫内膜厚度、血流、类型:黄体酮注射日两组子宫内膜厚度无统计学差异(P＞0.05），胚胎移植日中药组的子宫内膜厚度优于对照组(P＜0.05)。两组在黄体酮注射日均以A型内膜为主;移植日以C型内膜为主，且中药组较对照组C型率增加14％。黄体酮注射日中药组子宫内膜血流阳性率为54％，优于对照组30％(P＜0.05)，移植日中药组内膜血流阳性率为56％，优于对照组28％(P＜0.05)。　　(4) PI、RI:移植日子宫内膜螺旋动脉血流测量，中药组PI及RI均低于对照组(P＜0.05）。　　(5) HE染色观察子宫内膜组织形态:中药组移植日子宫内膜的腺体、腺腔面积大于对照组(P＜0.05），且中药组腺体扩大，分泌旺盛，见整齐的核下空泡。　　(6)扫描电镜观察胞饮突:RIF患者移植日子宫内膜胞饮突数量减少，中药组较对照组胞饮突发育成熟，形态饱满，表面绒毛减少。　　(7)E2、P及ER、PR:两组间E2、P无统计学差异(P＞0.05)。PCR检测移植日子宫内膜ER、PR结果显示，中药组二者的表达量均高于对照组(P＜0.05）。比较中药组与对照组中所有妊娠与未妊娠患者ER、PR的表达，免疫组化结果显示，ER的表达无统计学差异(P＞0.05)，但PR在妊娠组中呈高表达，较未妊娠组差异明显（P＜0.01）。　　(8)子宫内膜HOXA10、LIF、ITGβ3:mRNA表达显示，移植日子宫内膜组织中HOXA10、LIF、ITGβ3的表达中药组均高于对照组(P＜0.05），以HOXA10的差异尤其明显(P＜0.01)。　　结论:(1)温肾活血方能够增加胚胎着床障碍小鼠的平均着床位点数，增加RIF患者的临床妊娠率和种植率趋势;(2)温肾活血方能够优化子宫内膜形态，改善种植窗期子宫内膜厚度、类型和血流，增加胞饮突的数量并促进其成熟;(3)温肾活血方能够增加ER、PR、HOXA10、ITGβ3、LIF在子宫内膜种植窗期的表达;(4)温肾活血方通过Wnt信号通路上调β-连环蛋白、Wnt4、Wnt5a、Wnt7a的表达，抑制DKK1的表达。