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AREG(Amphiregulin)是上皮生长因子家族中的成员;AREG结合并激活上皮生长因子受体EGFR,促进EGFR形成同型二聚体或者异型二聚体,引发细胞内下游信号磷酸化,进而调节细胞的增殖和分化。本实验主要研究AREG调节肿瘤生长的生物学效应和相关机制。我们首先选择AREG表达水平较低的鼠肠癌细胞CT26,黑色素瘤B16细胞和AKT转化的肝癌细胞LPC-AKT构建AREG过表达及对照细胞系。通过MTT实验,克隆形成实验和细胞周期实验检测AREG对肿瘤细胞体外生长的作用。结果显示过表达AREG并不影响CT26、B16细胞和LPC-AKT细胞的增殖。通过CT26荷瘤小鼠模型,发现过表达AREG能够显著促进肿瘤细胞的体内生长;采用FACS和Real-Time PCR研究AREG对肿瘤组织中免疫细胞构成的影响及相关机制。结果显示过表达AREG可以降低肿瘤组织中的CD8~+T细胞的比例;过表达AREG可以显著下调肿瘤组织中的CCL5 mRNA的表达水平。我们进一步通过ELISA检测了辐照、化疗药物处理对肿瘤细胞产生AREG的影响。发现辐照和化疗药物依托泊苷和阿霉素处理可显著促进肿瘤细胞分泌AREG。利用CRISPR-Cas9系统去除Hepa1-6细胞中的AREG的表达,FACS和荷瘤小鼠实验比较辐照处理的AREG缺陷和表达的Hepa1-6细胞通过旁分泌机制对肿瘤细胞体内、外生长的影响。在体外培养条件下,辐照诱导的AREG表达并不能有效地促进肿瘤细胞生存;而在体内实验中,发现经辐照的AREG表达细胞可以显著促进LLC肺癌肿瘤生长,而AREG表达缺陷细胞没有促进作用。第三部分,筛选制备的抗人AREG单克隆抗体。获得5株针对AREG的单克隆抗体,这些抗体并不存在对人EGF和TGF-α的交叉反应,其中2株抗体具有一定的中和AREG信号的作用。总结:在我们实验系统中发现,AREG可以促进CT26细胞的体内生长,下调肿瘤微环境中相关趋化因子的表达,减少CD8~+T细胞的存在。辐照和化疗药物可诱导肿瘤细胞产生AREG,在辐照处理细胞促肿瘤生长效应中,AREG发挥重要作用。另外,我们获得了2株抗体具有一定的中和作用的抗人AREG单克隆抗体。本研究提示,AREG可以调控肿瘤微环境中免疫细胞组成、促进肿瘤生长;抑制AREG信号可能是一肿瘤治疗的新策略。