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胰腺导管腺癌是一种具有高度侵袭行为的恶性肿瘤,目前的治疗还是以手术为主,尽管结合了放疗、化疗等方法进行综合治疗,但疗效都不能令人满意,5年存活率低于5%。胰腺癌的形成是一个由多基因参与、多步骤的复杂过程,过去根据已知基因有目的的进行了一些研究,虽然发现部分基因与癌的发生、发展具有相关性,并且根据这些进行了基因治疗,但一直没有很好的效果。近年发展起来的新技术如基因芯片、组织芯片和蛋白质组学等,可以将更多的基因或蛋白质表达改变与人类疾病直接的联系起来,为阐明疾病发生、发展的机制和寻找新的治疗靶点开拓了更广阔的研究思路。 FXYD3就是在利用基因芯片技术对胰腺癌基因差异表达的研究中发现的,结果显示它在胰腺癌中表达远远高于慢性胰腺炎及正常胰腺组织。FXYD3是FXYD家族成员之一,也是Na,K-ATP酶的组织特异性调节器。在正常组织中,FXYD3主要表达于子宫、胃、结肠和皮肤。此外,有研究发现它在人原发乳腺癌和人乳腺癌细胞系、直肠结肠癌细胞系和前列腺癌中也表达。FXYD3不仅在某些癌中表达上调,而且部分表达与它们的分期相关。但目前为止,对FXYD3的正常生理功能及病理作用还不甚清楚。 本实验应用荧光定量PCR、Western Blot和免疫组化技术检测了FXYD3在人胰腺癌导管腺癌细胞系及组织中的表达,探讨了FXYD3作为胰腺癌治疗靶基因的可能性。以FXYD3为靶基因,筛查了9株人胰腺癌细胞系的表达。通过RT-PCR方法,在FXYD3高表达的人胰腺癌细胞系中克隆出FXYD3 cDNA,构建FXYD3重组质粒,并转染至FXYD3表达阴性的人胰腺癌细胞系。通过检测生长曲线、流式细胞术、荧光TUNEL系统及细胞体外侵袭实验等方法,初步评价FXYD3对胰腺癌的作用。 结果显示FXYD3蛋白在人胰腺导管腺癌组织中的阳性表达率为86.5%,与慢性胰腺炎(40%)、癌旁组织(13.5%)及正常胰腺组织(10%)比较,统计学上具有显著差异(P<0.01)。9株人胰腺癌细胞系中FXYD3在4株中有表达。9株胰腺癌细胞系的FXYD3两个转录子中,有4个突变点,其突变与细胞系的蛋白表达无关。将含有FXYD3 cDNA的质粒转染入阴性表达的人胰腺癌细胞系(Panc-1)后:结果显